1.干熱滅菌法
1.1灼燒與火焰滅菌:灼燒主要是用于接種工具滅菌,在火焰上灼燒即可達(dá)到徹底滅菌,火焰滅菌通常用于無菌操作中,將試管口、玻璃瓶口、硅氟塑料塞等反復(fù)通過火焰數(shù)次,利用火焰對管口等進(jìn)行滅菌,阻止管口污染,作為無菌操作過程中的輔助滅菌手段。
1.2干烤滅菌:利用熱輻射及干熱空氣進(jìn)行滅菌。一般將待檢滅菌的物品如金屬、玻璃、陶瓷制品包裝后,均可在烤箱內(nèi)干熱滅菌。通常加熱至160℃,保溫2h可完全滅菌。但不宜超過170℃,玻璃量具易變形。降溫過速,驟冷易引起玻璃器皿炸裂。干熱滅菌時裝入干烤箱內(nèi)的物品切勿緊密,應(yīng)有空隙,利于熱空氣流動,過密,致使溫度不均,部分物品滅菌不徹底。
2.濕熱滅菌法
通過加壓提高蒸汽溫度,用高壓蒸汽滅菌,穿透力強(qiáng),溫度高,滅菌效果最好。
注意事項:1.完全排除高壓滅菌器內(nèi)的冷空氣。有冷空氣存在時,在同一表壓下所達(dá)到的溫度值要低,而冷空氣排出越少,溫度就低得越多。在高壓蒸汽滅菌時,為保證達(dá)到規(guī)定的溫度,必須將冷空氣完全排除。否則,雖然壓力達(dá)到,而溫度達(dá)不到規(guī)定的要求,滅菌就不徹底。
3.紫外線 殺菌譜廣,但穿透力弱,影響因素多,殺菌效能受到一定限制。
紫外線消毒效果與紫外線強(qiáng)度、照射時間、溫度與濕度等因素有關(guān)。
我國規(guī)定紫外燈照射強(qiáng)度距離1m處不低于70μw/cm2。一般紫外燈使用超過100h,則應(yīng)更換。表面有塵土,降低滅菌效果。紫外燈殺菌的溫度以20~40℃,相對濕度40%~60%為宜。
熱力滅菌利用高溫殺死微生物的方法,稱為熱力滅菌。
當(dāng)高溫作用于微生物細(xì)胞時,首先引起生物細(xì)胞內(nèi)原生質(zhì)膠體的變性,酶結(jié)構(gòu)的破壞,從而使細(xì)胞失去了生活功能上的協(xié)調(diào),停止生長發(fā)育,隨著高溫的繼續(xù)作用,細(xì)胞內(nèi)原生質(zhì)便發(fā)生凝固,酶結(jié)構(gòu)完全破壞,活性消失,生化反應(yīng)停止。 滲透交換等新陳代謝活動消失,細(xì)胞立即死亡,這就是高溫滅菌的基本原理。
不同微生物對高溫的抵抗力不同。根據(jù)微生物生長繁殖與溫度的關(guān)系,可把它們分為3大類群:高溫性、中溫性和低溫性。
中溫性微生物耐高溫的能力不及高溫性微生物,但大于低溫性微生物,同一種微生物的不同生理狀態(tài)對高溫的忍耐力也大不相同。 處于營養(yǎng)生長期的微生物細(xì)胞,耐熱性差,因為該細(xì)胞內(nèi)各種酶系活躍,新陳代謝旺盛,細(xì)胞內(nèi)自由水含量多,受熱后膠體容易變性凝固,大部分真菌、酵母和細(xì)菌的營養(yǎng)體,在60°C水中加熱幾分鐘即死亡;但處于休眠體的微生物細(xì)胞,耐熱性卻很強(qiáng),真菌的孢子或細(xì)菌的芽孢,因為它們酶系活動幾乎停止,新陳代謝處在極低水平,細(xì)胞內(nèi)自由水含量少,結(jié)合水含量多,受熱后芽孢蛋白質(zhì)不易發(fā)生變性,大多數(shù)芽孢桿菌和梭菌的芽孢,在沸水中煮數(shù)分鐘或數(shù)小時,還能存活。
熱力滅菌經(jīng)常使用兩個殺菌指數(shù):熱死溫度和熱死速度。前者指在10分鐘內(nèi)可以殺死細(xì)菌懸液中所有細(xì)胞的溫度,后者指在一定溫度下,殺死所有細(xì)胞所需的時間。
在同樣溫度條件下,熱死溫度高的微生物,其熱死速度慢,熱死溫度低的微生物,其熱死速度快。提高滅菌溫度,可以加快熱死速度。
因此,可以通過提高滅菌溫度來縮短滅菌時間,或延長滅菌時間以降低滅菌溫度。熱力滅菌經(jīng)濟(jì)有效,簡便易行,是最普遍采用的方法。
它可以分為濕熱滅菌和干熱滅菌兩種。
(1)噴灑消毒將消毒藥用水稀釋成合適的濃度來噴灑消毒,主要用于畜禽舍、籠具、飼養(yǎng)場地、運輸工具及排泄物,周邊環(huán)境的消毒。
(2)熏蒸消毒一般用甲醛和高錳酸鉀混合后發(fā)生反應(yīng),產(chǎn)生的氣體具有強(qiáng)烈的刺激性氣味來達(dá)到消毒的目的,多用于密封舍的消毒和種蛋消毒。熏蒸消毒必須有較高的室溫和相對濕度,室溫不低于15℃,相對濕度為60%~80%,消毒時間為8~10小時。
(3)飲水消毒將消毒劑稀釋到合適的濃度,即將消毒藥加入一定量的水中,讓畜禽自由飲用,來消除腸道病菌。(4)浸泡消毒用于浸泡用具、器械的消毒。
1.干熱滅菌法1.1灼燒與火焰滅菌:灼燒主要是用于接種工具滅菌,在火焰上灼燒即可達(dá)到徹底滅菌,火焰滅菌通常用于無菌操作中,將試管口、玻璃瓶口、硅氟塑料塞等反復(fù)通過火焰數(shù)次,利用火焰對管口等進(jìn)行滅菌,阻止管口污染,作為無菌操作過程中的輔助滅菌手段。
1.2干烤滅菌:利用熱輻射及干熱空氣進(jìn)行滅菌。一般將待檢滅菌的物品如金屬、玻璃、陶瓷制品包裝后,均可在烤箱內(nèi)干熱滅菌。
通常加熱至160℃,保溫2h可完全滅菌。但不宜超過170℃,玻璃量具易變形。
降溫過速,驟冷易引起玻璃器皿炸裂。干熱滅菌時裝入干烤箱內(nèi)的物品切勿緊密,應(yīng)有空隙,利于熱空氣流動,過密,致使溫度不均,部分物品滅菌不徹底。
2.濕熱滅菌法通過加壓提高蒸汽溫度,用高壓蒸汽滅菌,穿透力強(qiáng),溫度高,滅菌效果最好。注意事項:1.完全排除高壓滅菌器內(nèi)的冷空氣。
有冷空氣存在時,在同一表壓下所達(dá)到的溫度值要低,而冷空氣排出越少,溫度就低得越多。在高壓蒸汽滅菌時,為保證達(dá)到規(guī)定的溫度,必須將冷空氣完全排除。
否則,雖然壓力達(dá)到,而溫度達(dá)不到規(guī)定的要求,滅菌就不徹底。3.紫外線 殺菌譜廣,但穿透力弱,影響因素多,殺菌效能受到一定限制。
紫外線消毒效果與紫外線強(qiáng)度、照射時間、溫度與濕度等因素有關(guān)。我國規(guī)定紫外燈照射強(qiáng)度距離1m處不低于70μw/cm2。
一般紫外燈使用超過100h,則應(yīng)更換。表面有塵土,降低滅菌效果。
紫外燈殺菌的溫度以20~40℃,相對濕度40%~60%為宜。
消毒 具有殺死致病微生物的作用或方法,稱為消毒。
滅菌 指徹底殺菌,即用物理或化學(xué)等方法,殺死物體上的一切微生物,以及它們的芽胞和孢子,使物體成為無菌狀態(tài)。常用消毒和滅菌方法 (一)物理滅菌方法 通過高潮、射線、微波以及器械進(jìn)行滅菌或除菌的方法均為物理滅菌方法。
1、熱力滅菌 利用高潮殺死微生物的方法,稱為熱力滅菌。熱力滅菌經(jīng)常使用兩個殺菌指數(shù):熱死溫度和熱死速度。
熱力滅菌經(jīng)濟(jì)有效,簡便易行,是最普遍采用的方法,它可以分為濕熱滅菌和干熱滅菌兩種。(1)濕熱滅菌 指利用熱蒸汽殺死微生物。
常用濕熱滅菌方法圾如下幾種。A.高壓蒸汽滅菌法 利用高溫高壓蒸汽進(jìn)行滅菌的方法。
高壓蒸汽滅菌可以殺死一切微生物,包括細(xì)菌的芽孢,真菌的孢子或休眠體等耐高溫的個體。滅菌的蒸汽溫度隨蒸汽壓力增加而升高,增加蒸汽壓力,滅菌的時間可以大大縮短。
因此它是一種最有效的、使用最廣泛的滅菌方法。使用高壓蒸汽滅菌時,應(yīng)注意以下幾點: a、滅菌鍋內(nèi)的冷氣必須排盡。
b、滅菌鍋內(nèi)的培養(yǎng)基必須排列疏松,使蒸汽暢通。 c、滅菌完畢,應(yīng)緩慢減壓。
d、注意棉塞防濕。B.常壓蒸汽滅菌法 采用自然壓力的蒸汽進(jìn)行滅菌的方法。
利用常壓蒸汽滅菌時,滅菌物品在滅菌鍋內(nèi)排列不能過密,要保證蒸汽能在鍋內(nèi)均勻地流通。流通蒸汽的溫度一般為100℃左右,要殺死耐熱性的芽胞, 必須延長滅菌時間,一般為6-8小時。
這種專用流通蒸汽滅菌灶的最大優(yōu)點是:容量大, 結(jié)構(gòu)簡單,成本低廉,可自行建造。缺點是滅菌時間長,能源消耗量大,稍不注意就有滅菌不徹底的現(xiàn)象發(fā)生。
C.間歇滅菌法 指間歇一定時間,連續(xù)消毒幾次達(dá)到滅菌的方法。此方法運用于不耐高溫的(100℃左右)培養(yǎng)基的滅菌。
欲殺死培養(yǎng)基的芽胞, 可將其在流通蒸汽中消毒20-30分鐘,先殺死其中的營養(yǎng)體細(xì)胞,然后將培養(yǎng)基在室溫或溫箱中培養(yǎng),使芽孢發(fā)芽長成營養(yǎng)體,再用流通蒸汽消毒20-30分鐘,殺死新長成的營養(yǎng)體細(xì)胞,這樣連續(xù)3次,即可殺死培養(yǎng)基中的全部芽孢,達(dá)到無菌狀態(tài)。(2)干熱滅菌 采用灼燒或干熱空氣滅菌,稱為干熱滅菌。
干熱滅菌主要有兩種類型。A.火焰滅菌法 即通過火焰高溫灼燒進(jìn)行滅菌的方法。
B.干熱滅菌法 即利用加熱的高溫空氣進(jìn)行滅菌的方法。2、輻射滅菌 利用輻射產(chǎn)生的能量進(jìn)行殺菌的方法,稱之輻射滅菌。
生產(chǎn)上應(yīng)用輻射滅菌方法主要是指此外線滅菌。3、過濾除菌 是利用機(jī)械的阻留方法來除去介質(zhì)中的微生物。
(二)化學(xué)滅菌方法 利用化學(xué)藥品滅菌或創(chuàng)造一個無菌環(huán)境,也是非常重要的滅菌手段。許多公演藥品可使菌體蛋白質(zhì)變性,有的可阻礙微生物的某一代謝環(huán)節(jié)。
因此,化學(xué)藥品可超到殺菌作用或抑菌作用。直接加入培養(yǎng)基能起滅菌作用,又不影響培養(yǎng)基成分的化學(xué)藥品并不多,根據(jù)報道β-丙烷內(nèi)酯(BPL)和焦碳酸二乙酯(PKE)具有這種作用,但應(yīng)用甚少。
有的具有殺菌和抑菌作用,但加入培養(yǎng)基后阻礙了香菇菌絲體生長發(fā)育,也不能被采用。香菇生產(chǎn)中常用的化學(xué)藥品及具體使用方法如下。
1、甲醛的殺菌機(jī)理是具有強(qiáng)還原作用。 2、硫磺及其熏蒸滅菌方法 3、乙醇類 乙醇又稱為酒精。
70-80%乙醇的殺菌能力較強(qiáng)。 4、酚及其衍生物 常用的是石碳酸,又名苯酚,純品為無色或白色針狀、塊狀或三棱形晶體,溶于水,具特殊氣味。
濃石碳酸能使皮膚變白、手指麻痹并可損壞皮膚與粘膜,對人畜有毒。0.5-1%的石碳酸水溶液作為噴霧劑處理無菌室(箱), 能起到降塵除菌、空氣消毒的作用;也可用3-5%的石碳酸水溶液對器械浸泡消毒。
在5%石碳酸水溶液中若加入0.85-0.9%的食鹽則可增加石碳酸藥效,如有乙醇存在時, 則藥效大減。 5、石灰與堿類 石灰分為生石灰(CaO)與熟石灰(Ca(OH)2)兩種。
起殺菌作用的是熟石灰中的氫氧根離子,能水解蛋白質(zhì)和核酸,使微生物的酶系和結(jié)構(gòu)受到損害,并能分解菌體中的糖類。 6、氧化劑與還原劑 高錳酸鉀、過氧化氫、鹵素(氯、溴、碘)及某些化合物(或絡(luò)合物),如漂白粉等均為氧化劑,可以殺菌。
亞硫酸及亞硫酸鹽等均為還原劑,能通過氧化還原反應(yīng)起到殺菌作用。 7、重金屬類 一些重金屬及其化合物,可使微生物的蛋白合成受破壞,亦可導(dǎo)致酶失活及取代細(xì)胞結(jié)構(gòu)上的主要元素,使微生物生長受掏或?qū)е滤劳觥?/p>
8、表面活性劑 具有降低表面張力的物質(zhì)稱為表面活性劑。常用的肥皂與十二烷基磺酸鈉類(如洗衣粉)的殺菌能力相當(dāng)于石碳酸的2-3倍。
9、氣霧消毒盒。
常用的消毒滅菌方法有兩大類:物理消毒滅菌法和化學(xué)消毒滅菌法。
物理消毒滅菌法是利用物理因素如熱力、輻射、過濾等清除或殺滅病原微生物的方法;化學(xué)消毒滅菌法是各種化學(xué)消毒劑來清除或殺滅病原微生物的方法。不能用物理^法消毒的可選用化學(xué)方法,包括高效、中效、低效消毒劑或滅菌劑。
其中物理消毒滅菌法包括如下內(nèi)容: (1) 熱力消毒滅菌法:①干熱法,包括燃燒法、干烤法;②濕熱法,包括壓力蒸汽滅菌法、煮沸消毒法等; (2) 輻射消毒法:①日光暴曬法;②紫外線消毒法;③臭氧消毒法; (3) 電離輻射滅菌法; (4) 微波消毒法; (5) 機(jī)械除菌法。
滅菌是指采用強(qiáng)烈的理化因素使任何物體內(nèi)外部的一切微生物永遠(yuǎn)喪失其生長繁殖能力的措施。
滅菌常用的方法有化學(xué)試劑滅菌、射線滅菌、干熱滅菌、濕熱滅菌和過濾除菌等。滅菌的徹底程度受滅菌時間與滅菌劑強(qiáng)度的制約。
微生物對滅菌劑的抵抗力取決于原始存在的群體密度、菌種或環(huán)境賦予菌種的抵抗力。滅菌是獲得純培養(yǎng)的必要條件,也是食品工業(yè)和醫(yī)藥領(lǐng)域中必需的技術(shù)。
方法的選擇 根據(jù)物品污染后導(dǎo)致感染的風(fēng)險高低選擇相應(yīng)的消毒或滅菌方法: 1)高危險度物品,應(yīng)采用滅菌的方法處理; 2)中危險度物品,應(yīng)采用達(dá)到中水平消毒以上效果的消毒方法; 3)低危險度物品,宜采用低水平消毒方法,或做清潔處理;遇有病原微生物污染時,針對所污染的病原微生物種類選擇有效的消毒方法 根據(jù)物品上污染微生物的種類、數(shù)量選擇消毒或滅菌的方法: 1) 對收到致病菌芽孢、真菌孢子、分枝桿菌和經(jīng)學(xué)傳播病原體污染的物品,應(yīng)采用高水平消毒或滅菌; 2)對受到真菌、親水病毒、螺旋體、支原體、衣原體等病原微生物污染的物品,應(yīng)采取中水平以上的消毒方法; 3)對受到一般細(xì)菌和親脂病毒等污染的物品,應(yīng)采用達(dá)到中水平或低水平的消毒方法。
1、重復(fù)使用的診療器械、器具和物晶?使用后應(yīng)先清潔。再進(jìn)行消毒或滅菌。
2 、被朊病毒、氣性壞疽及突發(fā)不明原因的傳染病病原體污染的診療器械、器具和物品?應(yīng)執(zhí)行本規(guī)范第ll章的規(guī)定。
3 耐熱、耐濕的手術(shù)器械?應(yīng)酋選壓力蒸汽滅菌?不應(yīng)采用化學(xué)消毒劑浸泡滅菌。
4 、環(huán)境與物體表面一般情況下先清潔。再消毒?當(dāng)受到患者的血液、體液等污染時?先去除污染物?再清潔與消毒。
5 、醫(yī)療機(jī)構(gòu)消毒工作中使用的消毒產(chǎn)品應(yīng)經(jīng)衛(wèi)生行政部門批準(zhǔn)或符合相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)規(guī)范?并應(yīng)遵循批準(zhǔn)使用的范圍、方法和注意事項。
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