細(xì)胞培養(yǎng)瓶(細(xì)胞培養(yǎng)的注意事項(xiàng)是什么?)

1.細(xì)胞培養(yǎng)的注意事項(xiàng)是什么?

原代動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)：

1、實(shí)驗(yàn)材料要新鮮，從活體分離材料后要低溫保存，并盡快進(jìn)行細(xì)胞分離實(shí)驗(yàn)。

2、無(wú)菌操作。操作時(shí)用的培養(yǎng)液，可加平時(shí)細(xì)胞培養(yǎng)液5倍含量的青鏈霉素。

3、用酶法分離細(xì)胞時(shí)，注意酶液的濃度和控制消化時(shí)間。

貼塊法分離細(xì)胞時(shí)，注意動(dòng)作要輕柔，不要傷到細(xì)胞組織，組織塊邊緣盡量平整有利于細(xì)胞游離。

4、培養(yǎng)液的選擇。不同的細(xì)胞有對(duì)培養(yǎng)液中營(yíng)養(yǎng)的要求不同，根據(jù)所分離細(xì)胞的特性選擇。

傳代細(xì)胞培養(yǎng)：

1、無(wú)菌操作

2、控制消化時(shí)間

3、及時(shí)關(guān)注細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)

2.細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程應(yīng)該注意什么問(wèn)題補(bǔ)充:可是很難保證完全無(wú)菌,很容易

細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的注意事項(xiàng) ⑴溫度 溫度過(guò)低時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢甚至不生長(zhǎng)。

利用冷凍保藏細(xì)胞可保持細(xì)胞的原有分裂分化能力。溫度過(guò)高導(dǎo)致細(xì)胞死亡。

這主要是由酶和蛋白質(zhì)所需要的最適溫度決定的。多數(shù)生物大分子遇到高溫后容易導(dǎo)致空間結(jié)構(gòu)改變或者喪失（變性）。

細(xì)胞膜遇到高溫后容易變態(tài)。在自然界，既有耐高溫的恒溫培養(yǎng)箱細(xì)胞，也有耐低溫的細(xì)胞。

在極端情況下生長(zhǎng)的生物對(duì)付極端環(huán)境的機(jī)制研究在生物進(jìn)化和農(nóng)業(yè)、環(huán)保、發(fā)酵工業(yè)中意義重大。 ⑵pH 過(guò)酸或過(guò)堿可導(dǎo)致細(xì)胞死亡。

這主要與蛋白質(zhì)的變性和細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)受損有關(guān)。 ⑶滲透壓 細(xì)胞內(nèi)外可溶于水的物質(zhì)比例和種類決定細(xì)胞的膨脹與收縮程度，因?yàn)榧?xì)胞膜是半透膜，只允許對(duì)自己有利的物質(zhì)通過(guò)。

同一物質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)外的分布的數(shù)量不同，當(dāng)某一種極溶于水的物質(zhì)在細(xì)胞外濃度過(guò)大時(shí)，有可能導(dǎo)致細(xì)胞干癟死亡，這些物質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)過(guò)多時(shí)導(dǎo)致細(xì)胞過(guò)量吸水膨脹。 細(xì)胞膜調(diào)節(jié)滲透壓的能力是有限的。

⑷營(yíng)養(yǎng)物 營(yíng)養(yǎng)物和水一起，又叫細(xì)胞培養(yǎng)液，培養(yǎng)液中含有細(xì)胞增殖和生長(zhǎng)所需要的各種物質(zhì)。營(yíng)養(yǎng)物包括：N 源、C源，這些物質(zhì)與提供能量有關(guān)；無(wú)機(jī)鹽、維生素、激素，這些物質(zhì)與代謝調(diào)節(jié)控制有關(guān)。

細(xì)胞培養(yǎng)液的設(shè)計(jì)一直是細(xì)胞離體培養(yǎng)技術(shù)的關(guān)鍵。理想的細(xì)胞培養(yǎng)液可以同時(shí)解決細(xì)胞離體培養(yǎng)所需要的pH、滲透壓、營(yíng)養(yǎng)物、調(diào)節(jié)物質(zhì)的全部需要。

在干細(xì)胞分化研究與應(yīng)用中，關(guān)鍵是找到一種使干細(xì)胞分化成為所需細(xì)胞和組織的營(yíng)養(yǎng)液。相同的人干細(xì)胞，放在不同的營(yíng)養(yǎng)液中分化培養(yǎng)出人的各種臟器，這個(gè)昔日的夢(mèng)想已經(jīng)開(kāi)始成為現(xiàn)實(shí)。

植物細(xì)胞的組織培養(yǎng)技術(shù)已經(jīng)基本完善配套。名貴花卉、中草藥、脫毒馬鈴薯、組織培養(yǎng)蓮菜苗等植物細(xì)胞與組織培養(yǎng)技術(shù)的不斷完善，特別是由于組織培養(yǎng)液的商品化已經(jīng)被廣大農(nóng)民普遍接受。

⑸水 水是細(xì)胞需要數(shù)量最大的物質(zhì)，不同的物種、不同部位、不同生長(zhǎng)期的細(xì)胞含水量差別相當(dāng)大。 干旱植物細(xì)胞的含水量高達(dá)90%。

水的需求量一般隨同細(xì)胞培養(yǎng)液一起考慮。 ⑹無(wú)菌條件 體外細(xì)胞培養(yǎng)僅僅是對(duì)所需的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，但環(huán)境中（如空氣）有各種其他微生物，必須對(duì)所需細(xì)胞進(jìn)行無(wú)雜菌的隔離培養(yǎng)。

無(wú)菌條件是細(xì)胞離體培養(yǎng)最基本的條件。 ⑺光 植物細(xì)胞和少數(shù)細(xì)菌需要利用光進(jìn)行光合作用。

⑻氣體 動(dòng)物細(xì)胞需要不斷供給氧氣和排除二氧化碳，植物細(xì)胞與此相反。 二氧化碳的作用：調(diào)節(jié)pH，有緩沖作用，沒(méi)有刺激動(dòng)物細(xì)胞呼吸的功能對(duì)不起，我記得也不是很清楚。

我只記得培養(yǎng)皿要消毒，然后培養(yǎng)過(guò)程中要加入抗生素（抑制細(xì)菌生長(zhǎng)），希望能幫到你···。

3.細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程應(yīng)該注意什么問(wèn)題

細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的注意事項(xiàng)

⑴溫度

溫度過(guò)低時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢甚至不生長(zhǎng)。利用冷凍保藏細(xì)胞可保持細(xì)胞的原有分裂分化能力。溫度過(guò)高導(dǎo)致細(xì)胞死亡。這主要是由酶和蛋白質(zhì)所需要的最適溫度決定的。多數(shù)生物大分子遇到高溫后容易導(dǎo)致空間結(jié)構(gòu)改變或者喪失（變性）。細(xì)胞膜遇到高溫后容易變態(tài)。在自然界，既有耐高溫的恒溫培養(yǎng)箱細(xì)胞，也有耐低溫的細(xì)胞。在極端情況下生長(zhǎng)的生物對(duì)付極端環(huán)境的機(jī)制研究在生物進(jìn)化和農(nóng)業(yè)、環(huán)保、發(fā)酵工業(yè)中意義重大。

⑵pH

過(guò)酸或過(guò)堿可導(dǎo)致細(xì)胞死亡。這主要與蛋白質(zhì)的變性和細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)受損有關(guān)。

⑶滲透壓

細(xì)胞內(nèi)外可溶于水的物質(zhì)比例和種類決定細(xì)胞的膨脹與收縮程度，因?yàn)榧?xì)胞膜是半透膜，只允許對(duì)自己有利的物質(zhì)通過(guò)。同一物質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)外的分布的數(shù)量不同，當(dāng)某一種極溶于水的物質(zhì)在細(xì)胞外濃度過(guò)大時(shí)，有可能導(dǎo)致細(xì)胞干癟死亡，這些物質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)過(guò)多時(shí)導(dǎo)致細(xì)胞過(guò)量吸水膨脹。細(xì)胞膜調(diào)節(jié)滲透壓的能力是有限的。

⑷營(yíng)養(yǎng)物

營(yíng)養(yǎng)物和水一起，又叫細(xì)胞培養(yǎng)液，培養(yǎng)液中含有細(xì)胞增殖和生長(zhǎng)所需要的各種物質(zhì)。營(yíng)養(yǎng)物包括：N 源、C源，這些物質(zhì)與提供能量有關(guān)；無(wú)機(jī)鹽、維生素、激素，這些物質(zhì)與代謝調(diào)節(jié)控制有關(guān)。細(xì)胞培養(yǎng)液的設(shè)計(jì)一直是細(xì)胞離體培養(yǎng)技術(shù)的關(guān)鍵。理想的細(xì)胞培養(yǎng)液可以同時(shí)解決細(xì)胞離體培養(yǎng)所需要的pH、滲透壓、營(yíng)養(yǎng)物、調(diào)節(jié)物質(zhì)的全部需要。在干細(xì)胞分化研究與應(yīng)用中，關(guān)鍵是找到一種使干細(xì)胞分化成為所需細(xì)胞和組織的營(yíng)養(yǎng)液。相同的人干細(xì)胞，放在不同的營(yíng)養(yǎng)液中分化培養(yǎng)出人的各種臟器，這個(gè)昔日的夢(mèng)想已經(jīng)開(kāi)始成為現(xiàn)實(shí)。植物細(xì)胞的組織培養(yǎng)技術(shù)已經(jīng)基本完善配套。名貴花卉、中草藥、脫毒馬鈴薯、組織培養(yǎng)蓮菜苗等植物細(xì)胞與組織培養(yǎng)技術(shù)的不斷完善，特別是由于組織培養(yǎng)液的商品化已經(jīng)被廣大農(nóng)民普遍接受。

⑸水

水是細(xì)胞需要數(shù)量最大的物質(zhì)，不同的物種、不同部位、不同生長(zhǎng)期的細(xì)胞含水量差別相當(dāng)大。干旱植物細(xì)胞的含水量高達(dá)90%。水的需求量一般隨同細(xì)胞培養(yǎng)液一起考慮。

⑹無(wú)菌條件

體外細(xì)胞培養(yǎng)僅僅是對(duì)所需的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，但環(huán)境中（如空氣）有各種其他微生物，必須對(duì)所需細(xì)胞進(jìn)行無(wú)雜菌的隔離培養(yǎng)。無(wú)菌條件是細(xì)胞離體培養(yǎng)最基本的條件。

⑺光

植物細(xì)胞和少數(shù)細(xì)菌需要利用光進(jìn)行光合作用。

⑻氣體

動(dòng)物細(xì)胞需要不斷供給氧氣和排除二氧化碳，植物細(xì)胞與此相反。

二氧化碳的作用：調(diào)節(jié)pH，有緩沖作用，沒(méi)有刺激動(dòng)物細(xì)胞呼吸的功能

4.細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)要注意哪些事項(xiàng)

即從短期、中期和長(zhǎng)期三個(gè)階段來(lái)規(guī)劃本單位的科研目標(biāo)，明確各個(gè)階段可以采用的科研工具、相關(guān)的資源需求、人員配置等要素；

相關(guān)的資源收集和管理

根據(jù)整體規(guī)劃中不同階段的資源需求，進(jìn)行相關(guān)資源的收集和管理；與HIS、LIS等系統(tǒng)接口，信息更加集中，更加易于分析；

保存箱空間利用率

樣本積累到一定數(shù)量后，手工方式查找和存放樣本非常困難而且容易出錯(cuò)，存放樣本的容器（例如冰箱、液氮罐）利用效率也會(huì)逐漸降低。因?yàn)橐婚_(kāi)始樣本可能是分類順序存放的，但是根據(jù)科研需求的不同，取樣會(huì)從容器的不同位置取走樣本，一段時(shí)間后，容器中會(huì)產(chǎn)生大量的零散空位卻無(wú)法有效利用。這就需要利用信息化系統(tǒng)來(lái)進(jìn)行樣本存放位置的自動(dòng)分配和查找，提高冰箱等容器的空間利用效率。

5.細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)注意的無(wú)菌操作主要有哪些

1.打開(kāi)無(wú)菌工作臺(tái)及凈化室的紫外燈，消毒半小時(shí)以上。

2.進(jìn)入凈化室前先關(guān)閉紫外燈，打開(kāi)超凈臺(tái)風(fēng)機(jī)，等待30min以上，以排盡臭氧。 3.穿好隔離衣，戴好口罩，帽子。

4.風(fēng)淋2分鐘。 5.0.1%過(guò)氧乙酸水泡手，擦干。

6.點(diǎn)燃酒精燈；超凈臺(tái)內(nèi)應(yīng)避免放入過(guò)多的物品；使用的吸管，滴管，試管，培養(yǎng)瓶等均事先滅菌。 7.打開(kāi)各類瓶蓋前先過(guò)火，以固定灰塵；打開(kāi)的瓶口、試管口過(guò)火焰，鑷子使用前應(yīng)經(jīng)火焰燒灼。

8.水平式風(fēng)機(jī)的超凈臺(tái)，應(yīng)使瓶口斜置，應(yīng)盡量避免瓶口敞開(kāi)直立。 9.同一根吸管或滴管不應(yīng)連續(xù)用于幾個(gè)不同的細(xì)胞系；吸取培養(yǎng)基的吸管應(yīng)離開(kāi)培養(yǎng)瓶或試管口0.5cm，避免伸入培養(yǎng)瓶口或試管口；以防止細(xì)胞系的互相混雜污染。

10.漏在培養(yǎng)瓶上或臺(tái)上的液體，立即用酒精棉球擦凈。 11.操作完畢后恢復(fù)工作臺(tái)面。