簡單染色法注意事項

1.普通顯微鏡的使用及細菌的簡單染色法實驗的注意事項有哪些

普通顯微鏡的使用：1.低倍鏡的使用方法 （1）取鏡和放置：顯微鏡平時存放在柜或箱中，用時從柜中取出，右手緊握鏡臂，左一手托住鏡座，將顯微鏡放在自己左肩前方的實驗臺上，鏡座后端距桌邊1-2寸為宜，便于坐著操作。

（2）對光：用拇指和中指移動旋轉(zhuǎn)器（切忌手持物鏡移動），使低倍鏡對準鏡臺的通光孔（當轉(zhuǎn)動聽到碰叩聲時，說明物鏡光軸已對準鏡筒中心）。打開光圈，上升集光器，并將反光鏡轉(zhuǎn)向光源，以左眼在目鏡上觀察（右眼睜開），同時調(diào)節(jié)反光鏡方向，直到視野內(nèi)的光線均勻明亮為止。

（3）放置玻片標本：取一玻片標本放在鏡臺上，一定使有蓋玻片的一面朝上，切不可放反，用推片器彈簧夾夾住，然后旋轉(zhuǎn)推片器螺旋，將所要觀察的部位調(diào)到通光孔的正中。 （4）調(diào)節(jié)焦距：以左手按逆時針方向轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器，使鏡臺緩慢地上升至物鏡距標本片約5毫米處，應(yīng)注意在上升鏡臺時，切勿在目鏡上觀察。

一定要從右側(cè)看著鏡臺上升，以免上升過多，造成鏡頭或標本片的損壞。然后，兩眼同時睜開，用左眼在目鏡上觀察，左手順時針方向緩慢轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器，使鏡臺緩慢下降，直到視野中出現(xiàn)清晰的物象為止。

如果物象不在視野中心，可調(diào)節(jié)推片器將其調(diào)到中心（注意移動玻片的方向與視野物象移動的方向是相反的）。如果視野內(nèi)的亮度不合適，可通過升降集光器的位置或開閉光圈的大小來調(diào)節(jié)，如果在調(diào)節(jié)焦距時，鏡臺下降已超過工作距離（>5.40mm）而未見到物象，說明此次操作失敗，則應(yīng)重新操作，切不可心急而盲目地上升鏡臺。

2.高倍鏡的使用方法 （1）選好目標：一定要先在低倍鏡下把需進一步觀察的部位調(diào)到中心，同時把物象調(diào)節(jié)到最清晰的程度，才能進行高倍鏡的觀察。（2）轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器，調(diào)換上高倍鏡頭，轉(zhuǎn)換高倍鏡時轉(zhuǎn)動速度要慢，并從側(cè)面進行觀察（防止高倍鏡頭碰撞玻片），如高倍鏡頭碰到玻片，說明低倍鏡的焦距沒有調(diào)好，應(yīng)重新操作。

（3）調(diào)節(jié)焦距：轉(zhuǎn)換好高倍鏡后，用左眼在目鏡上觀察，此時一般能見到一個不太清楚的物象，可將細調(diào)節(jié)器的螺旋逆時針移動約0.5-1圈，即可獲得清晰的物象（切勿用粗調(diào)節(jié)器！） 如果視野的亮度不合適，可用集光器和光圈加以調(diào)節(jié)，如果需要更換玻片標本時，必須順時針（切勿轉(zhuǎn)錯方向）轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器使鏡臺下降，方可取下玻片標本。3.油鏡的使用方法 （1）在使用油鏡之前，必須先經(jīng)低、高倍鏡觀察，然后將需進一步放大的部分移到視野的中心。

（2）將集光器上升到最高位置，光圈開到最大。（3）轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器，使高倍鏡頭離開通光孔，在需觀察部位的玻片上滴加一滴香柏油，然后慢慢轉(zhuǎn)動油鏡，在轉(zhuǎn)換油鏡時，從側(cè)面水平注視鏡頭與玻片的距離，使鏡頭浸入油中而又不以壓破載玻片為宜。

（4）用左眼觀察目鏡，并慢慢轉(zhuǎn)動細調(diào)節(jié)器至物象清晰為止。如果不出現(xiàn)物象或者目標不理想要重找，在加油區(qū)之外重找時應(yīng)按：低倍→高倍→油鏡程序。

在加油區(qū)內(nèi)重找應(yīng)按：低倍→油鏡程序，不得經(jīng)高倍鏡，以免油沾污鏡頭。（5）油鏡使用完畢，先用擦鏡紙沾少許二甲苯將鏡頭上和標本上的香柏油擦去，然后再用干擦鏡紙擦干凈。

顯微鏡使用的注意事項：1. 持鏡時必須是右手握臂、左手托座的姿勢，不可單手提取，以免零件脫落或碰撞到其它地方。2. 輕拿輕放，不可把顯微鏡放置在實驗臺的邊緣，以免碰翻落地。

3. 保持顯微鏡的清潔，光學(xué)和照明部分只能用擦鏡紙擦拭，切忌口吹手抹或用布擦，機械部分用布擦拭。4. 水滴、酒精或其它藥品切勿接觸鏡頭和鏡臺，如果沾污應(yīng)立即擦凈。

5. 放置玻片標本時要對準通光孔中央，且不能反放玻片，防止壓壞玻片或碰壞物鏡。6. 要養(yǎng)成兩眼同時睜開的習(xí)慣，以左眼觀察視野，右眼用以繪圖。

7. 不要隨意取下目鏡，以防止塵土落入物鏡，也不要任意拆卸各種零件，以防損壞。8. 使用完畢后，必須復(fù)原才能放回鏡箱內(nèi)，其步驟是：取下標本片，轉(zhuǎn)動旋轉(zhuǎn)器使鏡頭離開通光孔，下降鏡臺，平放反光鏡，下降集光器（但不要接觸反光鏡）、關(guān)閉光圈，推片器回位，蓋上綢布和外罩，放回實驗臺柜內(nèi)。

最后填寫使用登記表。（注：反光鏡通常應(yīng)垂直放，但有時因集光器沒提至應(yīng)有高度，鏡臺下降時會碰壞光圈，所以這里改為平放） 細菌的簡單染色法：1. 涂片：用灼燒滅菌冷卻后的接種環(huán)挑取少量菌體與水滴充分混勻，涂成極薄的菌膜.2. 干燥：可自然晾干，或?qū)⑼科糜诨鹧娓咛幬岷娓?，但不能直接在火焰上烘?3. 固定：手執(zhí)玻片一端，有菌膜的一面朝上，通過迅速通過火焰2-3次（用手指觸涂片反面，以不燙手為宜）.4. 染色：加適量（以蓋滿菌膜為度）結(jié)晶紫染色液（或石炭酸復(fù)紅液），染l~2min.5. 水洗：用自來沖洗至流下的水中無染色液的顏色時為止.6. 干燥7. 鏡檢 細菌的簡單染色法注意事項：1. 革蘭氏染色成敗的關(guān)鍵是酒精脫色。

如脫色過度，革蘭氏陽性菌也可被脫色而染成陰性菌；如脫色時間過短，革蘭氏陰性菌也會被染成革蘭氏陽性菌。脫色時間的長短還受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影響，難以嚴格規(guī)定。

2. 染色過程中勿使染色液干涸。用水沖洗后，應(yīng)吸去玻片上的殘水，以免染色液被稀釋而影響染色效果。

3. 選用幼齡的細菌。G+菌培養(yǎng)12h-16h,E.coli培養(yǎng)。

2.簡單染色發(fā)中各種步驟的注意事項是什么

革蘭染色過程所用四種不同溶液和作用： 1、堿性染料：這在簡單染色中已討論過，此處用結(jié)晶紫. 2、媒染劑：其作用是增強染料與細菌的親和力，更好地加強染料與細胞的結(jié)合.常用的媒染劑是碘液. 3、脫色劑：幫助染料從被染色的細胞中脫色.利用細菌對染料脫色的難易程度不同，而將細菌加以區(qū)分.革蘭陽性細菌不易被脫色劑脫色，而革蘭陰性細菌則易被脫色.常用的脫色劑是丙酮或乙醇，這里所用的是95%的乙醇. 4、復(fù)染液：也是一種堿性染料，目的是使脫色的細菌重新染上另一種顏色，以便與未脫色菌進行比較.這里用的是蕃紅花紅溶液. 革蘭染色的實驗步驟 1.涂片：左手持菌液試管，右手持接種環(huán)，用接種環(huán)從試管培養(yǎng)液中取一環(huán)菌，于載玻片中央涂成薄層（事先在背面做好標記圓圈）即可，或先滴一小滴無菌水于載玻片中央，用接種環(huán)從斜面上挑出少許，與載玻片上的水滴混合均勻，涂成一薄層. 拔或塞試管塞時，應(yīng)將試管口通過火焰略加燒灼，最后將接種環(huán)在火焰上燒灼滅菌. 2.干燥：涂片后在室溫下自然干燥，也可在酒精燈上略加溫，使之迅速干燥，但勿靠近火焰. 3.固定：常用高溫進行固定.即手持載玻片一端，標本面朝上，在燈的火焰外側(cè)快速來回移動3~4次，共約3~4秒.要求玻片溫度不超過60℃，以玻片背面觸及手背皮膚不覺過燙為宜，放置待冷后染色. 固定的目的是： ① 殺死微生物，固定其細胞結(jié)構(gòu)； ② 保證菌體能牢固地粘附在載玻片上，以免水洗時被水沖掉； ③ 改變菌體對染料的通透性，一般死細胞原生質(zhì)容易著色. 4.染色：將固定好的涂片放于報紙上，每次滴加一滴染液進行染色. 注意：乙醇脫色時滴加乙醇至流出液為無色立即進行水洗； 蕃紅復(fù)染由于時間較長，應(yīng)在染液干燥前補加染液； 鏡檢時吸水注意不要擦標本. 革蘭染色的實驗現(xiàn)象 如果將細菌做革蘭染色，凡染后菌體呈藍紫色的，稱為“革蘭陽性菌”；菌體是伊紅色，稱“革蘭陰性菌”.無論陽性菌還是陰性菌，都有桿菌和球菌.葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌是臨床最為常見的病原菌，葡萄球菌屬于革蘭陽性菌，大腸桿菌屬于革蘭陰性菌中的腸桿菌科，除大腸桿菌以外，臨床較常見的腸桿菌科細菌還有變形桿菌屬，沙門菌屬、克霉白菌屬；銅綠假單胞菌是臨床常見的較耐藥革蘭陰性桿菌.。

3.普通光學(xué)顯微鏡的使用及細菌的簡單染色法實驗的注意事項有哪些

由于細菌體積小且透明，在活體細胞內(nèi)又含有大量的水分，因此，對光線的吸收和反射與水溶液相差不大。

當把細菌懸浮在水滴內(nèi)，放在顯微鏡下觀察時，由于與周圍背景沒有顯著的明暗差，難于看清它們的形狀，更談不上識別其細微結(jié)構(gòu)。而經(jīng)過染色，就可借助顏色的反襯作用比較清楚地看到菌體形態(tài)，亦即菌體表面及內(nèi)部結(jié)構(gòu)著色與背景形成鮮明對比，這樣便可在下清晰地觀察到微生物的形狀和結(jié)構(gòu)，而且還可以通過不同的染色反應(yīng)來鑒別微生物的類型和區(qū)分死、活細菌等，因此，染色技術(shù)是觀察細菌形態(tài)結(jié)構(gòu)的重要手段。

4.革蘭氏染色步驟的操作注意事項

革蘭氏染色最常用的細菌鑒別染色法之一。

未經(jīng)染色之細菌，由于其與周圍環(huán)境折光率差別甚小，故在顯微鏡下極難觀察。染色后細菌與環(huán)境形成鮮明對比，可以清楚地觀察到細菌的形態(tài)、排列及某些結(jié)構(gòu)特征，而用以分類鑒定。

革蘭氏染色屬復(fù)染法，即將標本固定后，先用龍膽紫染色，加碘液媒染后用酒精脫色，再用稀釋復(fù)紅復(fù)染。染色后除可以看到細菌形態(tài)外，還可將細菌分為兩大類，即不被酒精脫色而保留紫色者為革蘭氏陽性菌（G+）。

被酒精脫色復(fù)染成紅色者為革蘭氏陰性菌（G-）。革蘭氏染色原理尚不肯定，可能與細菌所帶核糖核酸、細菌壁結(jié)構(gòu)通透性、等電點等因素有關(guān)。

致病菌如金黃色葡萄球菌、綠色溶血性鏈球菌、肺炎球菌、白喉桿菌、碳疽桿菌等屬革蘭氏染色陽性菌。百日咳桿菌、大腸桿菌、傷寒桿菌、痢疾桿菌、霍亂弧菌、流行性腦膜炎雙球菌、淋病雙球菌等均屬革蘭氏陰性。

所以根據(jù)細菌的革蘭氏染色性質(zhì)，可以縮小鑒定范圍，有利于進一步分離鑒定，以對疾病做出診斷。又由于各種抗生素的抗菌譜不同，革蘭氏染色尚可做為選用抗生素的參考。

5.一般的染色方法有哪些.需要具體解釋

在微生物學(xué)主要有兩種染色方法：

一、簡單染色：利用單一染料對菌體進行染色。主要步驟：涂片、干燥、固定、染色、水洗、鏡檢。

常用的微生物細胞染料都是鹽，分酸性染料和堿性染料兩大類：

美蘭、甲基紫、結(jié)晶紫、堿性復(fù)紅、中性紅、孔雀綠和蕃紅等都屬于堿性染料；

伊紅、剛果紅、藻紅、苦味酸和酸性復(fù)紅等屬于酸性染料。

二、革蘭氏染色法：原理與革蘭氏陰、陽性細菌的細胞壁結(jié)構(gòu)差異有關(guān)。主要用于區(qū)分這兩種細菌。被染成藍紫色者即為革蘭氏陽性菌（G+）；被染成紅色者是革蘭氏陰性菌（G-）。主要步驟：制片、初染、媒染、脫色、復(fù)染、鏡檢。

6.細菌的簡單染色方法怎樣操作

(1)觀察微生物時為什么必須采用染色方法細菌、真菌、和其他微生物的細胞質(zhì)是透明的，不借助染色方法很難觀察到這些微生物。

(2)簡單染色的生化原理

細菌細胞通常帶負電荷，簡單染色時采用已知的、帶正電荷的堿性染料與菌體細胞黏附使菌體著色。經(jīng)染色后的細菌細胞與背景形成鮮明對比。

生物幫上面有這方面的詳細介紹， 電鏡，電子顯微鏡，電子顯微鏡原理，掃描電鏡，透射電鏡。

7.HE染色的方法步驟及注意事項

一、實驗步驟：

(1)樣品制備：對于貼壁生長細胞，胰酶消化，調(diào)整細胞濃度約1*105/ml，滴加于蓋玻片上（置于6孔板中），培養(yǎng)相應(yīng)時間后，取出細胞爬片，用PBS 洗滌3次。

(2)樣品固定：95%乙醇固定20min,PBS洗滌2次，每次1min。

(3)染核：蘇木素染液染色2-3min，自來水洗滌。

(4)分色：鏡下觀察，若細胞核染色過深，用1%鹽酸酒精溶液分色數(shù)秒，自來水洗滌。

(5)染胞質(zhì)：浸入伊紅染液染色1min，自來水洗滌。

(6)吹干或自然晾干細胞 爬片后，中性樹膠封片。

若細胞用4%多聚甲醛固定，則染色時間相應(yīng)延長，蘇木素染色12-15min，伊紅5min即可。

二、注意事項：

1、染色時調(diào)節(jié)pH值很重要。如果組織塊在福爾馬林中固定時間長，組織酸化而影響細胞核著色。因此，要在自來水中沖洗時間長一些或在飽和碳酸鋰水溶液中處理10-30min，這樣可以使細胞核著色較深。染伊紅時胞漿著色不佳，可在伊紅溶液中滴加1-2滴冰醋酸。

2、切片染蘇木精后，分色這一步是關(guān)鍵，應(yīng)在顯微鏡下控制進行，一般以細胞核染色清楚（晰）而細胞質(zhì)基本無色為佳。如果過分延長分色時間將導(dǎo)致染色太淺，應(yīng)重新染色后再行分色。

3、切片經(jīng)酒精脫水后，入二甲苯時可出現(xiàn)白色不透明狀態(tài)，此為脫水不徹底，應(yīng)將切片退回無水酒精，更換酒精、二甲苯，以求徹底脫水與透明。

4、在染色過程中不要讓切片干燥，以免切片收縮、變形，影響神經(jīng)元形態(tài)。

5、切片從二甲苯取出或進入二甲苯前，切片周邊均應(yīng)擦干凈或吸干多余水分。

6、最后封固時，要用中性樹脂，防止日后褪色，蓋片要選大于組織塊的面積，如漏出一部分不久將會褪色，所用樹脂濃度要適當，樹脂封固時不能有氣泡。

擴展資料

一、細胞核染色原理：

蘇木精為堿性天然染料，可使細胞核著色。細胞核內(nèi)染色質(zhì)的成分主要是DNA，在DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)中，兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外。

使DNA雙螺旋的外側(cè)帶負電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木精堿性燃料以離子鍵或氫鍵結(jié)合而被染色。蘇木精在堿性溶液中呈藍色，所以細胞核被染成藍色。

二、細胞漿染色原理：

細胞漿內(nèi)主要成分是蛋白質(zhì)，為兩性化合物、細胞漿的染色與pH值有密切關(guān)系，當pH調(diào)到蛋白質(zhì)等電點4.7-5.0時，胞漿對外不顯電性，此時酸或堿性染料不易染色。

當pH調(diào)到6.7-6.8時，大于蛋白質(zhì)的等電點pH值，表現(xiàn)酸性電離，而帶負電荷的陰離子，可被帶正電荷的染料染色，現(xiàn)時胞核也被染色，核和胞漿難以區(qū)分。因此必須把pH調(diào)至胞漿等電點以下，在染液中加入醋酸使胞漿帶正電荷（陽離子），就可被帶負電荷（陰離子）的染料染色。

伊紅Y是一種化學(xué)合成的酸性染料，在水中離解成帶負電荷的陰離子，與蛋白質(zhì)的氨基正電荷（陽離子）結(jié)合而使細胞漿染色，細胞漿、紅細胞、肌肉、結(jié)締組織，嗜伊紅顆料等被感染成不同程度的紅色或粉紅色，與藍色的細胞核形成鮮明的對比。

參考資料來源：搜狗百科-he染色

8.細菌簡單染色

簡單染色法是利用單一染料對細菌進行染色的一種方法。此法操作簡便，適用于菌體一般形狀和細菌排列的觀察。

常用堿性染料進行簡單染色，這是因為：在中性、堿性或弱酸性溶液中，細菌細胞通常帶負電荷，而堿性染料在電離時，其分子的染色部分帶正電荷（酸性染料電離時，其分子的染色部分帶正電荷），因此堿性染料的染色部分很容易與細菌結(jié)合使細菌著。染色后的細菌細胞與背景形成鮮明的對比，在顯微鏡下更易于識別。

常用作簡單染色的染料有：美藍、結(jié)晶紫、堿性復(fù)紅等。

你使用草酸銨結(jié)晶紫染色液，染色迅速，著色深，菌體呈紫色。

9.HE染色的方法步驟及注意事項

HE染色步驟：

1、脫蠟，脫蠟二甲苯Ⅰ、Ⅱ各10分鐘，事先準備好蓋玻片。

2、覆水，100%（Ⅰ、Ⅱ）、90%、80%、70%酒精各5分鐘，自來水沖洗5分鐘*3。

3.、蘇木精染色5分鐘，根據(jù)染色情況，可以適當增加或減少染色時間，流水沖洗。

4、5%乙酸分化1分鐘，流水沖洗，用吸管滴加乙酸，布滿玻片上的組織即可，分化后顏色變淺了一些，成為藍色。

5、返藍：返藍液，實驗室沒有，也可不用。

6、伊紅染色1分鐘，根據(jù)染色情況，可以適當增加或減少染色時間，流水沖洗。

7、脫水：70%、80%、90%、100%酒精各10秒，二甲苯1分鐘，可以在通風(fēng)櫥自然晾干再封

片，約5分鐘左右。

8、滴上中性樹膠，封片，用吸管滴上一滴即可，盡量少滴，但壓片后要將組織全部覆蓋完，避免中間有氣泡。

擴展資料：

he染色原理：

易于被堿性或酸性染料著色的性質(zhì)稱為嗜堿性（ basophilia ）和嗜酸性（ acidophilia ）；而對堿性染料和酸性染料親和力都比較弱的現(xiàn)象稱為中性（neutrophilia）。

構(gòu)成組織內(nèi)蛋白質(zhì)的氨基酸的種類很多，它們有不同的等電點。在普通染色法中，染色液的酸堿度為pH6左右，細胞內(nèi)的酸性物質(zhì)如細胞核的染色質(zhì)、腺細胞和神經(jīng)細胞內(nèi)的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及透明軟骨基質(zhì)等均被堿性染料染色，這些物質(zhì)稱為嗜堿性。

而細胞質(zhì)中的其它蛋白質(zhì)如紅細胞中的血紅蛋白、嗜酸粒細胞的顆粒及膠原纖維和肌纖維等被酸性染料染色，這些物質(zhì)稱為嗜酸型。如果改變?nèi)旧旱乃釅A度，pH值升高時，則原來被酸性染料染色的物質(zhì)可變?yōu)槭葔A性；pH值降低時，原來被堿性染料染色的物質(zhì)則可變?yōu)槭人嵝浴?/p>

所以說染色液的pH值可以影響染色的反應(yīng)。脫氧核糖核酸（DNA）兩條鏈上的磷酸基向外，帶負電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木精堿性染料以離子鍵結(jié)合而被染色。蘇木精在堿性溶液中呈藍色，所以細胞核被染成藍色。

參考資料來源：百度百科—he染色