簡述rna常用的提取方法(RNA的提取方法)
1.RNA的提取方法有哪些
通過變性劑破碎細胞或者組織，然后經(jīng)過氯仿等有機溶劑抽提RNA，再經(jīng)過沉淀，洗滌，晾干，最后溶解。
但是由于RNA酶無處不在，隨時可能將RNA降解，所以實驗中有很多地方需要注意，稍有疏忽就會前功盡棄。 0 T3 z( F& _, D6 c% ^" h6 Y A6 _RNA提取的一般步驟 - O: Y+ x$ p# s8 U4 M9 S 所有RNA的提取過程中都有五個關鍵點，即：樣品細胞或組織的有效破碎；有效地使核蛋白復合體變性；對內(nèi)源RNA酶的有效抑制；有效地將RNA從DNA和蛋白混合物中分離；對于多糖含量高的樣品還牽涉到多糖雜質的有效除去。
但其中最關鍵的是抑制RNA酶活性。RNA的提取目前階段主要可采用兩種途徑：提取總核酸，再用氯化鋰將RNA沉淀出來；直接在酸性條件下抽提，酸性下DNA與蛋白質進入有機相而RNA留在水相。
第一種提取方法將導致小分子量RNA的丟失，目前該方法的使用頻率已很低。（ O( g; ^+ K) f+ i& ]% P 實驗步驟： * l& d6 s5 e( q1 F( g2 | j, ^0 s 破碎組織→分離RNA→沉淀RNA→洗滌RNA→融解RNA→保存RNA。
6 D8 }. Q; Y, g* X 1、破碎組織和滅活RNA酶可以同步進行，可以用鹽酸胍、硫氰酸胍、NP-40、SDS、蛋白酶K等破碎組織，加入β-ME可以抑制RNA酶活性。 " s% f, `0 [1 d* m! ]0 e2、分離RNA一般用酚、氯仿等有機溶劑，加入少量異戊醇，經(jīng)過此步，離心，RNA一般分布于上層，與蛋白層分開。
& X. P) i) Y; L# u/ [3、沉淀RNA一般用乙醇、3M NaAc(pH-5.2)或異丙醇。2 @0 d& z7 ?+ i, g1 @ 4、洗滌RNA使用70%乙醇洗滌，有時，為避免RNA被洗掉，此步可以省掉，洗滌之后可以晾干或者烤干乙醇，但是不能過于干燥，否則不易溶解。
3 @% V" o9 v+ I1 J2 o9 k" z5、融解RNA一般使用TE。 ; L5 f. n6 }( S1 t% Z& J6、保存RNA應該盡量低溫。
為了防止痕量RNase的污染，從富含RNase的樣品（如胰臟、肝臟）中分離到的RNA需要貯存在甲醛中以保存高質量的RNA，對于長期貯存更是如此。從大鼠肝臟中提取的RNA，在水中貯存一個星期就基本降解了，而從大鼠脾臟中提取的RNA，在水中保存3年仍保持穩(wěn)定。
另外，長度大于4kb的轉錄本對于痕量RNase的降解比小轉錄本更敏感。為了增加貯存RNA樣品的穩(wěn)定性，可以將RNA溶解在去離子的甲酰胺中，存于-70℃。
用于保存RNA的甲酰胺一定不能含有降解RNA的雜物。來源于胰臟的RNA至少可以在甲酰胺中保存一年。
當準備使用RNA時，可以使用下列方法沉淀RNA：加入NaAc至0.3M,12,000*g離心5分鐘。 & P3 [7 m* ^$ U$ _" ? : F" x u* N( ?( I氯化鋰法提取總RNA: " u; }' I! r' ^' ^& l 本方法用高濃度尿素變性蛋白并抑制RNA酶，用氯化鋰選擇沉淀RNA，其特別適合于從大量樣品中提取少量組織RNA，具有快速簡潔的長處，但也存在少量DNA的污染及RNA得率不高，小RNA片斷丟失的缺陷。
# ~* S: }9 `* r4 Z3 P 試驗試劑： " d$ r6 Q+ _. I8 Q1、氯化鋰/尿素溶液【氯化鋰126g(3M) 尿素、360g(6M) 加水至1L，過濾滅菌】 7 _8 w1 t" o9 a' q! i4 Z2、懸浮液【10mM? Tris-HCL (pH7.6) ,1mM? EDTA (pH8,0) ,0.5%SDS】 ！ m8 Q4 R, ]& y: b# `7 d試驗步驟：7 [6 ?$ `* }; o7 _ Z' { 1、對于大量組織或細胞，則每克組織或細胞加入5-10ml氯化鋰-尿素溶液，勻槳器高速勻槳2分鐘；對于少量細胞（107個細胞/ml），則每克組織或細胞加入0.5ml氯化鋰-尿素溶液手工勻槳，并轉移至Eppendof管中。& Y) b: E, Q" l/ ^ Q: \$ s 2、勻槳液在0-4℃放置4小時后，12000g離心30分鐘。
x- C6 D- N/ N0 K! t2 a 3、取沉淀，加入原勻槳液1/2體積的氯化鋰-尿素溶液，重復步驟2。 ) y- x) S0 K9 y6 j, e4、沉淀用原勻槳液1/2體積的氯化鋰-尿素溶液復溶后，加入等體積酚/氯仿/異戊醇在室溫放置15-30分鐘并不時搖動混勻，4000g離心5分鐘。
3 d2 v' i1 ~( ~* D5、取上層水相，加1/10倍體積的3M乙酸鈉（pH5.2）及2倍體積的乙醇，-20℃放置1小時，5000g離心。 L4 a' Q4 u" l: a* K% Z$ ?( e6、70%乙醇洗沉淀一次。
真空干燥。3 }; r0 [/ Q' G9 q 7、RNA溶解液溶解沉淀，得RNA，分裝，于-70℃保存。
0 f. X% R( H% B7 g ! y7 j5 u$ C' |) [% ~! J3 D: Q蛋白酶-熱酚法6 |" ^0 b* [) P3 S* c4 b4 H4 l 本方法適合于病毒RNA的提取 * I( i+ b# r! K試驗試劑： $ ？4 [7 H9 `) J1、蛋白酶K（終濃度50ug/ml）, J5 p l6 V/ t7 [/ I 2、2*緩沖液：1%SDS? 20mMTris-HCL (pH 7.6)? 0.2MnaCL9 h, p ] y+ \$ Z) O 試驗步驟：# W3 v8 G1 [$ ]5 y 1、提純病毒液中加入等體積緩沖液、蛋白酶K,37℃40-50分鐘。 - K0 p/ E' G0 M# Q- z7 n, {# d2、加入等體積65℃預熱的酚溶液，輕徭，在65℃保溫5分鐘后再輕徭。
w! `; W( ~, E: i3 ^3、離心，取上清，氯仿抽提一次。， |（ Z0 d; j2 @7 m+ d2 Q& x H 4、取上層水相，加1/10倍體積的3M乙酸鈉（pH5.2）及2倍體積的乙醇，-20℃放置1小時，5000g離心（10000g,10min）。
7 [/ w, h2 d6 U$ k5、70%乙醇洗沉淀一次。真空干燥。
% A5 Y; {( w% ]3 a* y, O e) P6、RNA溶解液溶解沉淀，得RNA，分裝，于-70℃保存。植物RNA提取過程中難點的相應對策 植物RNA提取過程中難點的相應對策 ） o5 B7 d/ Q3 _酚類化合物的干擾及對策： 。
2.RNA的提取方法步驟及原理.
RNA抽取一般使用Trizol法抽提：
Trizol是一種總RNA抽提試劑，內(nèi)含異硫氰酸胍等物質，能迅速裂解細胞，抑制細胞釋放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法進行提取組織或細胞中的RNA。
Trizol作用原理：
在勻質化或溶解樣品中，Trizol試劑可保持RNA的完整性，同時能破壞細胞及溶解細胞成分。加入氯仿離心后，裂解液分層成水相和有機相。RNA存在于水相中。
水相轉移后，RNA通過異丙醇沉淀回收。移去水相后，用乙醇可從中間相沉淀得到DNA，加入異丙醇沉淀可從有機相得到蛋白質。
擴展資料
與DNA不同，RNA一般為單鏈長分子，不形成雙螺旋結構，但是很多RNA也需要通過堿基配對原則形成一定的二級結構乃至三級結構來行使生物學功能。
RNA的堿基配對規(guī)則基本和DNA相同，不過除了A-U、G-C配對外，G-U也可以配對。
在細胞中，根據(jù)結構功能的不同，RNA主要分三類，即tRNA（轉運RNA）,rRNA（核糖體RNA）,mRNA（信使RNA）。mRNA是合成蛋白質的模板，內(nèi)容按照細胞核中的DNA所轉錄；tRNA是mRNA上堿基序列（即遺傳密碼子）的識別者和氨基酸的轉運者；rRNA是組成核糖體的組分，是蛋白質合成的工作場所。
參考資料來源：百度百科-RNA
3.RNA的提取方法
1、酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎細胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯萃取，高速離心后取上清，所得DNA大小為100-150kb
2、甲酰胺解聚法：破碎細胞同上，然后用高濃度甲酰胺解聚蛋白質與DNA的結合，再透析獲得DNA可得DNA200kb左右。
3、玻璃棒纏繞法：用鹽酸胍裂解細胞，將裂解物鋪于乙醇上，然后用帶鉤或U型玻璃棒在界面輕攪，DNA沉淀液繞于玻棒。生成DNA約80kb。
4、異丙醇沉淀法：基本同1法，僅用二倍容積異丙醇替代乙醇，可去除小分子RNA（在異丙醇中可溶狀態(tài)）
5、表面活性劑快速制備法：用Triton X-100A或NP40表面活性劑破碎細胞，然后用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉淀或透析。
6、加熱法快速制備：加熱96℃-100℃，五分鐘，然后離心后取上清，可用于PCR反應。
7、堿變性快速制備：先用NaOH作用20分鐘，再加HCI中和，離心后取上清，含少量DNA。
擴展資料：
DNA提取原則：
1、保證核酸一級結構的完整性；
2、核酸樣品中不應存在對酶有抑制作用的有機溶劑和過高濃度的金屬離子；
3、其他生物大分子如蛋白質、多糖和脂類分子的污染應降低到最低程度；
4、其他核酸分子，如RNA，也應盡量去除。
參考資料來源：百度百科——DNA提取
4.提取制備RNA常用的方法有哪幾種,各有何優(yōu)缺點
常見的RNA提取方法有苯酚法、陰離子去污劑法、LiCl一尿素法、改良的Gomez法、異硫氫酸胍法、CTAB法、熱硼酸法及改良熱硼酸法、TRIZOL試劑快速提取法。
RNA提取時，就變性劑的選擇來說，CTAB(CTAB法)比異硫氰酸胍（RIZOL試劑法）和 SDS（改良熱硼酸法）更有效；就CTAB法來說，由于以CTAB為變性劑，同時加入PVP和β一巰基乙醇共同作用變性蛋白、抑制RNase的活性，使用無水乙醇或異丙醇沉淀雜蛋白和總核酸等，然后再選擇性地分離出RNA。
5.RNA提取方法
1.提取
稱取鮮酵母 159或干酵母粉 2.5g，倒入 100ml三角瓶中，加 NaCl 2.5g，水25ml，攪拌均勻，置于沸水浴中提取lh。
2.分離
將上述提取液用自來水冷卻后，裝入大離心管內(nèi)，以4000r/min離心10min，使提取液與菌體殘渣等分離。
3.沉淀RNA
將離心得到的上清液傾于50ml燒杯內(nèi)，并置入放有冰塊的250ml燒杯中冷卻.待冷至10℃以下時，用6mol/L HCI 小心地調節(jié)pH值至2.0~2.5（注意嚴格控制pH）。調好后繼續(xù)于冰水中靜置10min，使沉淀充分，顆粒變大。
4.洗滌和抽濾
上述懸浮液以 4000r/min離心 10min，得到 RNA沉淀。將沉淀物放在 10ml小燒杯內(nèi)，用95%的乙醇 5~10ml充分攪拌洗滌，然后在布氏漏斗上用射水泵抽氣過濾，再用 95%乙醇5~10ml淋洗 3次。
5.干燥
從布氏漏斗上取下沉淀物，放在6cm表面皿上，鋪成薄層，置于80℃烘箱內(nèi)干燥。將干燥后的RNA制品稱重，存放于干燥器內(nèi)。
6.RNA提取用什么方法,具體的步驟
1. 勻漿處理：a.組織 將組織在液氮中磨碎，每50-100mg組織加入1ml TRIzol，用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積（即3.5cm直徑的培養(yǎng)板）加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c.細胞懸液 離心收集細胞，每5-10*106動物、植物、酵母細胞或1*107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。
2.將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3.可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節(jié)部分等）可于2-8℃10000*g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
生物上面有這方面的介紹，空心纖維細胞培養(yǎng)系統(tǒng)
7.RNA提取方法
1.提取稱取鮮酵母 159或干酵母粉 2.5g，倒入 100ml三角瓶中，加 NaCl 2.5g，水25ml，攪拌均勻，置于沸水浴中提取lh。
2.分離將上述提取液用自來水冷卻后，裝入大離心管內(nèi)，以4000r/min離心10min，使提取液與菌體殘渣等分離。3.沉淀RNA 將離心得到的上清液傾于50ml燒杯內(nèi)，并置入放有冰塊的250ml燒杯中冷卻.待冷至10℃以下時，用6mol/L HCI 小心地調節(jié)pH值至2.0~2.5（注意嚴格控制pH）。
調好后繼續(xù)于冰水中靜置10min，使沉淀充分，顆粒變大。 4.洗滌和抽濾 上述懸浮液以 4000r/min離心 10min，得到 RNA沉淀。
將沉淀物放在 10ml小燒杯內(nèi)，用95%的乙醇 5~10ml充分攪拌洗滌，然后在布氏漏斗上用射水泵抽氣過濾，再用 95%乙醇5~10ml淋洗 3次。5.干燥從布氏漏斗上取下沉淀物，放在6cm表面皿上，鋪成薄層，置于80℃烘箱內(nèi)干燥。
將干燥后的RNA制品稱重，存放于干燥器內(nèi)。
