瘤內(nèi)注射方法(注射方法)
1.注射方法有哪些
注射途徑有以下幾種：①皮內(nèi)注射。
用量小，常用于各種過敏試驗、預(yù)防接種及局部麻醉。②皮下注射。
常用于疫苗和菌苗的預(yù)防接種、局部麻醉及某些藥物的注射。有刺激性的藥物不宜皮下注射。
對少數(shù)心功能不全或重度脫水的病人也可采用皮下輸液。③肌肉注射。
可注射各種有刺激性的藥物。一般進(jìn)針2.5~3cm。
臀大肌使用最多，從臀裂頂點向左或右一側(cè)劃一水平線，然后從髂嵴最高點上作一垂直平分線，在外上方1/4處為注射部位。注射時肌肉放松，進(jìn)針、拔針迅速，推藥緩慢可減輕痛苦。
④靜脈注射。常用于急重病人，以求迅速發(fā)揮療效。
除注入藥物外，也可注入造影劑以助診斷。靜脈注射對無菌技術(shù)要求較嚴(yán)格。
⑤靜脈滴注?？捎靡暂斎胨幬?、營養(yǎng)液、血液及其制劑，也可補充血容量，維持酸堿和水電平衡等。
為避免長時間輸液引起的淺靜脈栓塞，可以切或穿刺深靜脈后進(jìn)行靜脈點滴，這樣可持續(xù)較長時間，避免每天穿刺。⑥動脈注射。
將某種較濃的藥液和血液快速注入動脈血管，以達(dá)到快速補充血容量，抗休克，提高冠狀動脈灌流量和抗腫瘤的目的?？勺⑷肟鼓[瘤藥，使藥物迅速完全到達(dá)腫瘤。
注入透析液、吸附劑以治療腎功能衰竭、肝昏迷、高血脂癥。也可將造影劑快速注入動脈做腦血管造影、脊髓動脈造影、腎動脈造影、左心或冠狀動脈造影。
⑦心內(nèi)注射。向心室腔內(nèi)注入使心搏恢復(fù)的藥物。
常與心臟按摩同時應(yīng)用。有胸外和胸內(nèi)（開胸后應(yīng)用）兩種注入法。
常用藥物有腎上腺素、普魯卡因酰胺、利多卡因、阿托品等。⑧體腔內(nèi)注射。
將藥物注入各體腔內(nèi)進(jìn)行治療。常用的有腦室內(nèi)注射、鞘內(nèi)注射、胸膜腔內(nèi)注射、腹腔內(nèi)注射、關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射等。
2.將外源基因?qū)朐思?xì)胞或真核細(xì)胞分別有哪些方法
1 物理方法
1.1 DNA直接注射法： 是目的基因?qū)氲淖詈唵畏椒ǎ?但注入量有限， 能夠接觸到的腫瘤細(xì)胞有限，故獲得的腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)化率很低， 多通過腫瘤局部多點注射給藥。
1.2 顆粒轟擊技術(shù)：將目的基因包被金屬以后，利用高壓發(fā)射裝置， 加速包裹目的基因的金屬顆粒進(jìn)入細(xì)胞，從而提高腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率。
2 化學(xué)方法
即用化學(xué)方法構(gòu)建非病毒載體系統(tǒng)，借之完成基因轉(zhuǎn)導(dǎo)。主要包括以下兩種。
2.1 脂質(zhì)體載體：方法具有安全、簡單、低毒、無免疫原性等優(yōu)點，適用于注射方法進(jìn)行器官靶向性轉(zhuǎn)移并有一定的轉(zhuǎn)移效率。是除病毒載體轉(zhuǎn)移方法之外的另一種有價值的體內(nèi)基因轉(zhuǎn)移方法。多用于體外轉(zhuǎn)化細(xì)胞，或通過瘤組織內(nèi)注射〔1〕進(jìn)行體內(nèi)轉(zhuǎn)化，并已有少數(shù)臨床應(yīng)用的報告。目前常用的是陽離子脂質(zhì)體（商品名為Lipofectin）。它可自發(fā)的與DNA形成復(fù)合物，保護(hù)外源DNA不被核酸酶降解，具有制備簡單、安全無毒、無免疫原性、重復(fù)性、對基因片段大小無限制且轉(zhuǎn)染操作方便等優(yōu)點。由于它可與細(xì)胞膜直接融合而能有效地避免溶酶體破壞，故遠(yuǎn)比傳統(tǒng)的脂質(zhì)體效率高。缺點是靶向性有限。Nishikawa等〔2〕從BALB/c小鼠的尾靜脈注射以熒光素酶基因為報告基因的質(zhì)粒DNA-脂質(zhì)體復(fù)合物， 發(fā)現(xiàn)肺、肝、脾等器官組織中都有熒光素酶基因及其產(chǎn)物，持續(xù)表達(dá)超過3個月。常規(guī)脂質(zhì)體易被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)（RES）細(xì)胞攝取，在巨噬細(xì)胞本身可成為靶細(xì)胞的部位，RES的這種親合性是有利的。Hasegawa等〔3〕采用日本血凝病毒（ hemagglutinating virus of Japan , HVJ）脂質(zhì)體為載體，用HSV-tk/Gcv系統(tǒng)治療肝癌發(fā)現(xiàn)，在體外試驗中當(dāng)Gcv的濃度100microg/ml時幾乎所有腫瘤均被殺死，甚至當(dāng)轉(zhuǎn)導(dǎo)率只有20%時，也有1/3腫瘤被消滅。此方法重復(fù)應(yīng)用效果更佳，且皮下注射未見明顯的炎癥反應(yīng)。
2.2 受體介導(dǎo)法：利用肝細(xì)胞上富含轉(zhuǎn)移因子和糖蛋白受體的特點，人工合成多聚陽離子氨基酸，進(jìn)而連接轉(zhuǎn)移因子（或糖蛋白）和目的基因構(gòu)成復(fù)合物，通過與肝細(xì)胞表面的受體結(jié)合來實現(xiàn)目的基因的轉(zhuǎn)移。此法靶向性好，但受體介導(dǎo)的內(nèi)吞小泡會被轉(zhuǎn)運到溶酶體，易被溶酶體降解而造成目的基因表達(dá)時間短暫，表達(dá)效率低下。利用氯哇抑制溶酶體酶或腺病毒與內(nèi)吞小泡相融合而將其破壞釋放出外源DNA，可提高轉(zhuǎn)化效率。
3 生物學(xué)方法
主要通過構(gòu)建病毒載體來完成。
3.1 逆轉(zhuǎn)錄病毒（retrovirus,Rv）：構(gòu)建簡單，裝載外源基因容量最大達(dá)8kb，整合入宿主細(xì)胞基因組而無病毒蛋白表達(dá)。但僅能感染分裂期細(xì)胞，體外制備滴度較低，且其隨機(jī)整合有引起“插入性突變”的可能〔4〕。
3.2 腺病毒（adenovirus, Adv）： 為近年肝細(xì)胞肝癌基因治療中報告最多的一種病毒載體〔5〕。體外制備滴度較大 ，裝載外源基因容量最大達(dá)35kb，不整合入宿主細(xì)胞基因組因而避免插入突變的危險，能感染分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞。但易引起宿主免疫反應(yīng)而使轉(zhuǎn)染效率下降，且大劑量靜脈給予可導(dǎo)致嚴(yán)重的肝臟炎癥反應(yīng)，因此通過全身給藥受到限制。Nagao等〔6〕發(fā)現(xiàn)瘤內(nèi)注射重組Adv后，目的基因可有效表達(dá)，但表達(dá)時間短暫，重復(fù)注射后表達(dá)效率降低且誘發(fā)體液和細(xì)胞免疫反應(yīng)。
3.3 單純皰疹病毒：單純皰疹病毒（herps simplex virus,HSV）對非分裂細(xì)胞有天然的親合力，裝載外源基因容量達(dá)30kb，體外制備滴度接近腺病毒。但構(gòu)建時難以除去與裂解細(xì)胞有關(guān)的基因而對細(xì)胞毒性大〔7〕。
3.4 腺相關(guān)病毒：腺相關(guān)病毒（adeno-associated virus,AAV）在人類不引起任何病理性后果，它能感染非分裂S相細(xì)胞，還能將基因轉(zhuǎn)人非周期（noncyling）腫瘤細(xì)胞。AAV是一種缺陷前病毒，對人類無致病性。能用于運載外源性重組基因組，已應(yīng)用于肝和肝癌細(xì)胞的治療基因轉(zhuǎn)移〔8〕。
3.5 其他病毒：痘苗病毒〔9〕（vaccini virus）可以獨立在細(xì)胞之中復(fù)制和轉(zhuǎn)錄，并能以較強的方式表達(dá)多個腫瘤抗原。桿狀病毒〔10〕（bacul virus）能夠感染肝細(xì)胞和肝腫瘤細(xì)胞，并能增強肝細(xì)胞腫瘤壞死因子a(TNFa)、IL-1a、IL-lβ的表達(dá)。
