氨基酸分離方法(氨基酸的分離分析方法常有)

1.氨基酸的分離分析方法常有有哪些

如果是兩個(gè)氨基酸的保留時(shí)間距離太近，那么只能調(diào)整液相條件了。

比如調(diào)整流動(dòng)相比例，或者是梯度比例，把兩個(gè)氨基酸拉開(kāi)。

也可以適當(dāng)調(diào)整衍生程序。

雖然衍生程序不會(huì)對(duì)氨基酸的保留時(shí)間有影響，不過(guò)會(huì)對(duì)它的信號(hào)產(chǎn)生影響。

如果這兩種氨基酸的峰高有所下降，或許分離度也可以達(dá)到要求。

還有就是注意峰型。

衍生化程序很容易損壞色譜柱，超高效色譜的壓力又高，色譜柱很容易損毀。

如果峰型不好，建議用純乙腈低流速反沖色譜柱。

或者是更換新色譜柱。

2.氨基酸的分離

一、沉淀法：1.利用氨基酸的溶解度分離或等電點(diǎn)沉淀

2.特殊試劑沉淀法

二、離子交換：離子交換是利用不溶性高分子化合物，就是離子交換樹脂對(duì)不同氨基酸吸附能力的差異對(duì)氨基酸混合物進(jìn)行分組或?qū)崿F(xiàn)單一成分的分離.

三、萃?。?、反應(yīng)萃?。哼x取適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)萃取劑，其解離出來(lái)的離子與氨基酸解離出來(lái)的離子發(fā)生反應(yīng)，生成可以溶于有機(jī)溶劑的萃取配合物，從而使氨基酸從水相進(jìn)入有機(jī)相.

2、反相微膠團(tuán)萃?。悍聪辔⒛z團(tuán)是溶在有機(jī)溶劑中的表面活性劑自發(fā)形成的納米級(jí)的聚體，表面活性劑的極性尾與外在非極性的有機(jī)溶劑接觸，而極性頭則排列在內(nèi)形成極性核，極性核溶于水后就形成了“水池”，當(dāng)含有氨基酸的水溶液與反相微膠團(tuán)的有機(jī)溶劑相混合時(shí)，氨基酸以帶電離子狀態(tài)進(jìn)入反相微膠團(tuán)的水池內(nèi)而被分離

氨基酸分離的方法還有很多，但是常用的就是離子交換.

全手打，

3.氨基酸的分離

一、沉淀法：1.利用氨基酸的溶解度分離或等電點(diǎn)沉淀2.特殊試劑沉淀法二、離子交換：離子交換是利用不溶性高分子化合物，就是離子交換樹脂對(duì)不同氨基酸吸附能力的差異對(duì)氨基酸混合物進(jìn)行分組或?qū)崿F(xiàn)單一成分的分離.三、萃?。?、反應(yīng)萃取：選取適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)萃取劑，其解離出來(lái)的離子與氨基酸解離出來(lái)的離子發(fā)生反應(yīng)，生成可以溶于有機(jī)溶劑的萃取配合物，從而使氨基酸從水相進(jìn)入有機(jī)相.2、反相微膠團(tuán)萃?。悍聪辔⒛z團(tuán)是溶在有機(jī)溶劑中的表面活性劑自發(fā)形成的納米級(jí)的聚體，表面活性劑的極性尾與外在非極性的有機(jī)溶劑接觸，而極性頭則排列在內(nèi)形成極性核，極性核溶于水后就形成了“水池”，當(dāng)含有氨基酸的水溶液與反相微膠團(tuán)的有機(jī)溶劑相混合時(shí)，氨基酸以帶電離子狀態(tài)進(jìn)入反相微膠團(tuán)的水池內(nèi)而被分離氨基酸分離的方法還有很多，但是常用的就是離子交換.全手打，。

4.如何用紙層析法對(duì)氨基酸分離

氨基酸的分離鑒定——紙層析法

一，實(shí)驗(yàn)?zāi)康?

掌握氨基酸紙層析的方法和原理，學(xué)會(huì)分析待

測(cè)樣品的氨基酸成分.

二，實(shí)驗(yàn)原理

紙層析是以濾紙為惰性支持物的分配層析.濾紙纖維上的羥基具有親水性，吸附一層水作為固定相，有機(jī)溶劑為流動(dòng)相.當(dāng)有機(jī)相流經(jīng)固定相時(shí)，物質(zhì)在兩相間不斷分配而得到分離.

溶質(zhì)在濾紙上的移動(dòng)速度用Rf值表示：

Rf=原點(diǎn)到層析斑點(diǎn)中心的距離/原點(diǎn)到溶劑前沿的距離

在一定的條件下某種物質(zhì)的Rf值是常數(shù).Rf值的大小與物質(zhì)的結(jié)構(gòu)，性質(zhì)，溶劑系統(tǒng)，層析濾紙的質(zhì)量和層析溫度等因素有關(guān).本實(shí)驗(yàn)利用紙層析法分離氨基酸.

三，實(shí)驗(yàn)器材

(1)大燒杯（5000mL）:1只/組

(2)微量注射器（100 L）:1只/ 組.

(3)噴霧器：公用.

(4)培養(yǎng)皿：1只/組.

(5)層析濾紙（長(zhǎng)22cm，寬14cm的新華一號(hào)濾紙）：1張/組.

(6)直尺，鉛筆：自備.

(7)電吹風(fēng)：1只/組.

(8)托盤，針，白線：1套/組.

(9)手套：1雙/組.

(10)塑料薄膜：公用.

(11)小燒杯：50mL,1只/組.

四，實(shí)驗(yàn)試劑

(1)擴(kuò)展劑：將4體積正丁醇和1體積冰醋酸放入分液漏斗中，與5體積水混合，充分振蕩，靜置后分層，棄去下層水層.

(2)氨基酸溶液：0.5%的已知氨基酸溶液3種（賴氨酸，苯丙氨酸，纈氨酸），0.5%的待測(cè)氨基酸液1種.

(3)顯色劑：0.1%水合茚三酮正丁醇溶液.

實(shí)驗(yàn)試劑

五，實(shí)驗(yàn)操作

檢查培養(yǎng)皿是否干燥，潔凈；若否，將其洗凈并置于干燥箱內(nèi)120℃烘干.

(1)平衡：剪一大塊塑料薄膜鋪在桌面上，將層析缸或大燒杯到置于塑料薄膜上，再把盛有約20mL展層溶液的小燒杯置于倒置的層析缸或大燒杯中，用塑料薄膜密封起來(lái)，平衡20min.

(2)規(guī)劃：帶上手套，取寬約14cm，高約22cm的層析濾紙一張.在紙的下端距邊緣2cm處輕輕用鉛筆劃一條平行于底邊的直線A，在直線上做4個(gè)記號(hào)，記號(hào)之間間隔2cm，這就是原點(diǎn)的位置.另在距左邊緣1cm處畫一條平行于左邊緣的直線B，在B線上以A,B兩線的交點(diǎn)為原點(diǎn)標(biāo)明刻度（以厘米為單位），參見(jiàn)左圖.

(3)點(diǎn)樣：用微量注射器分別取10mL左右的氨基酸樣品（每取一個(gè)樣之前都要用蒸餾水洗滌微量注射器，以免交叉污染），點(diǎn)在這四個(gè)位置上.擠一滴點(diǎn)一次，同一位置上需點(diǎn)2~3次，2~3mL/次，每點(diǎn)完一點(diǎn)，立刻用電吹風(fēng)熱風(fēng)吹干后再點(diǎn)，以保證每點(diǎn)在紙上擴(kuò)散的直徑最大不超過(guò)3mm.每人須點(diǎn)4個(gè)樣，其中3個(gè)是已知樣，1個(gè)是待測(cè)樣品.

(4)層析：用針，線將濾紙縫成筒狀，紙的兩側(cè)

邊緣不能接觸且要保持平行，參見(jiàn)圖3-3.向培養(yǎng)皿中加入擴(kuò)展劑，使其液面高度達(dá)到1cm左右，將點(diǎn)好樣的濾紙筒直立于培養(yǎng)皿中（點(diǎn)樣的一端在下，擴(kuò)展劑的液面在A線下約1cm），罩上大燒杯，仍用塑料薄膜密封.當(dāng)擴(kuò)展劑上升到A線時(shí)開(kāi)始計(jì)時(shí)，每隔一定時(shí)間測(cè)定一下擴(kuò)展劑上升的高度，填入表3-1中.當(dāng)上升到15~18cm，取出濾紙，剪斷連線，立即用鉛筆描出溶劑前沿線，迅速用電吹風(fēng)熱風(fēng)吹干.

(5)顯色：用噴霧器在通風(fēng)廚中向?yàn)V紙上均勻噴上0.1%茚三酮正丁醇溶液，然后立即用熱風(fēng)吹干，即可顯出各層析斑點(diǎn)，參見(jiàn)左圖.

(6)計(jì)算各種氨基酸的Rf值，并判斷混合樣品中都有哪些氨基酸，各人將自己的實(shí)驗(yàn)結(jié)果貼在實(shí)驗(yàn)報(bào)告上，見(jiàn)表3-2.

(7)以層析時(shí)間為橫坐標(biāo)，擴(kuò)展劑上升高度為縱坐標(biāo)畫圖，求出擴(kuò)展劑上升到18cm時(shí)所需要的時(shí)間.

(8)將微量注射器內(nèi)外用蒸餾水清洗干凈，倒掉用過(guò)的展層液和平衡液，將培養(yǎng)皿洗凈，整理好桌面上的儀器和試劑.

5.求助幾種氨基酸化學(xué)拆分的方法

氨基酸有必須氨基酸和非必須氨基酸，非必須氨基酸可以在人和動(dòng)物體內(nèi)合成，必需氨基酸需依靠食物供給，而植物能合成自身所需的全部氨基酸。

氨基酸合成的公共途徑有還原性氨基化作用、氨基轉(zhuǎn)移作用、氨基酸的相互轉(zhuǎn)化作用。 1、還原性氨基化作用 在多數(shù)機(jī)體中，NH3同化主要是經(jīng)谷氨酸和谷氨酰胺合成途徑完成的。

（1）、谷氨酸合成的主要途徑是由L-谷氨酸脫氫酶催化的α-酮戊二酸氨基化途徑 （2）、谷氨酰胺合成酶和谷氨酸合成酶聯(lián)合作用，將游離氨轉(zhuǎn)變?yōu)楣劝彼岬摩?氨基。 2、氨基轉(zhuǎn)移作用 氨基轉(zhuǎn)移作用是由一種氨基酸把它的分子上的氨基轉(zhuǎn)移至其它α-酮酸上。

以形成另一種氨基酸。 植物細(xì)胞內(nèi)存在的轉(zhuǎn)氨作用主要有下列三種： 3、氨基酸的相互轉(zhuǎn)化作用 在有些情況下，氨基酸間也可以相互轉(zhuǎn)化。

如由蘇氨酸或絲氨酸可生成甘氨酸，由色氨酸或胱氨酸可生成丙氨酸。 氨基酸的合成需要有氨基和碳架。

氨基是由已有的氨基酸經(jīng)轉(zhuǎn)氨作用提供的，許多氨基酸均可作為氨基的供體，其中主要的是谷氨酸；碳架來(lái)自于糖酵解，三羧酸循環(huán)，乙醇酸途徑和磷酸戊糖途徑的α-酮酸，如α-酮戊二酸、草酰乙酸、丙酮酸和乙醛酸。