通常獲得目的基因的方法(獲得目的基因有幾種主要方法)
1.獲得目的基因有幾種主要方法
獲得目的基因常用的方法有PCR法、化學合成法、cDNA法及建立基因文庫的方法來篩選
直接獲取
1.從基因文庫中獲取 這個沒什么就是現(xiàn)成的基因儲存在受體菌上你用的時候提取出來就好了（基因組文庫法 就是原教材中的用限制性內(nèi)切酶直接獲取。利用λ噬菌體載體構(gòu)建基因組文庫的一般操作程序如下：① 選用特定限制性內(nèi)切酶， DNA進行部分酶解，得到DNA限制性片段② 選用適當?shù)南拗菩詢?nèi)切酶酶解λ噬菌體載體DNA。③ 經(jīng)適當處理，將基因組DNA限制性片段與λ噬菌體載體進行體外重組。④ 利用體外包裝系統(tǒng)將重組體包裝成完整的顆粒。⑤ 以重組噬菌體顆粒侵染大腸桿菌，形成大量噬菌斑，從而形成含有整個DNA的重組DNA群體，即文庫。）經(jīng)典解釋
2.cDNA文庫法（即原教材中提到的逆轉(zhuǎn)錄法）。cDNA文庫，是指匯集以某生物成熟mRNA為模板逆轉(zhuǎn)錄而成的cDNA序列的重組DNA群體。雖然可用基因組文庫法來獲取真核生物的目的基因，但是由于高等真核生物基因組DNA文庫比其cDNA文庫大得多，相關(guān)工作量同樣大得多。更為重要的是，在真核生物基因組中合有大量的間隔序列或內(nèi)含子，但在大腸桿菌等原核生物中沒有類似序列的存在，所以大腸桿菌不能從真核生物基因的初級轉(zhuǎn)錄本中去除間隔序列，即不能表達真核生物DNA。而在真核生物成熟mRNA中已不存在間隔序列（已在拼接過程中被去除），所以可以以真核生物成熟mRNA為模板，逆轉(zhuǎn)錄而成的cDNA可被大腸桿菌表達。因此，在基因工程中，cDNA文庫法是從真核生物細胞中分離目的基因的常用方法。
3.直接分離基因最常用的方法是“鳥槍法”，又叫“散彈射擊法”。這種方法有如用獵槍發(fā)射的散彈打鳥，無論哪一顆彈粒擊中目標，都能把鳥打下來。鳥槍法的具體做法是：用限制酶（即限制性內(nèi)切酶）將供體細胞中的DNA切成許多片段，將這些片段分別載入運載體，然后通過運載體分別轉(zhuǎn)入不同的受體細胞，讓供體細胞所提供的DNA（外源DNA）的所有片段分別在受體細胞中大量復制（在遺傳學中叫做擴增），從中找出含有目的基因的細胞，再用一定的方法吧帶有目的基因的DNA片段分離出來。如許多抗蟲，抗病毒的基因都可以用上述方法獲得。
用“鳥槍法”獲取目的基因的優(yōu)點是操作簡便，缺點是工作量大，具有一定的盲目性。
人工合成
1.（主要是序列已知的基因）。主要是通過DNA自動合成儀，通過固相亞磷酸酰胺法合成，具體過程可以網(wǎng)上查詢，反正是可以按照已知序列將核苷酸一個一個連接上去成為核苷酸序列，一般適于分子較小而不易獲得的基因。對于大的基因一般是先用化學合成法合成引物，再利用引物獲得目的基因。
2.聚合酶鏈反應(yīng)（Polymerase Chain Reaction ,PCR）是80年代中期發(fā)展起來的體外核酸擴增技術(shù)。它具有特異、敏感、產(chǎn)率高、快速、簡便、重復性好、易自動化等突出優(yōu)點；能在一個試管內(nèi)將所要研究 的目的基因或某一DNA片段于數(shù)小時內(nèi)擴增至十萬乃至百萬倍，使肉眼能直接觀察和判斷；可從一根毛發(fā)、一滴血、甚至一個細胞中擴增出足量的DNA供分析研 究和檢測鑒定。過去幾天幾星期才能做到的事情，用PCR幾小時便可完成。PCR技術(shù)是生物醫(yī)學領(lǐng)域中的一項革命性創(chuàng)舉和里程碑
2.獲取目的基因的方法有哪些（詳細）
原發(fā)布者：最后一抹夕陽88
第四章目的基因的獲得目的基因?準備要分離、改造、擴增或表達的基因。編碼某種蛋白質(zhì)研究某基因與疾病的關(guān)系研究某基因結(jié)構(gòu)和功能的關(guān)系一、基因的基本結(jié)構(gòu)特征一個能轉(zhuǎn)錄、翻譯的結(jié)構(gòu)基因依次包括以下幾部分：轉(zhuǎn)錄啟動區(qū)、核糖體識別區(qū)、編碼區(qū)（包括起始密碼子ATG、開放閱讀框、終止密碼子TAG、TAA或TGA）和轉(zhuǎn)錄終止區(qū)。（一）原核生物基因的組成——操縱子?啟動子：RNA聚合酶識別、結(jié)合和開始轉(zhuǎn)錄的片段；?SD區(qū)：糖體16SrRNA識別、結(jié)合mRNA的位置；?轉(zhuǎn)錄終止子和終止因子：分別指基因或操縱子3'端提供轉(zhuǎn)錄終止信號的DNA序列；協(xié)助mRNA聚合酶識別終止信號的輔助蛋白。?原核的終止子在終止點之前有一回文結(jié)構(gòu)，轉(zhuǎn)錄物形成莖環(huán)發(fā)夾。（二）真核生物基因的組成?基因區(qū)：ATG+extrons+introns+TAA(TGA或TAG)?轉(zhuǎn)錄啟動區(qū)：編碼蛋白的啟動子（RNA聚合酶Ⅱ識別）可尋找三個保守區(qū)：TATAA/TA區(qū)（Hogness框）、CAAT框、GC框。?轉(zhuǎn)錄終止區(qū)：真核生物轉(zhuǎn)錄的終止信號并不清楚。二、目的基因的獲得方法?目前克隆目的基因常用的方法有四種方法：化學合成法、cDNA文庫法、PCR法和RT-PCR法。（一）化學合成法?將已知序列的目的基因利用化學合成的方法直接合成。?特點：①只能合成小于100個堿基特定序列；②自動化程度較高；③合成速度較快。?方法：磷酸二酯法、磷酸三酯法、固相亞磷酸三酯法化學合成法的用途?合成天然基因
3.獲取目的基因的常用方法是哪種
..剛好學到
基因工程流程的第一步就是獲得目的DNA片段，如何獲得目的DNA片段就成為基因工程的關(guān)鍵問題。所需目的基因的來源，不外乎是分離自然存在的基因或人工合成基因。常用的方法有PCR法、化學合成法、cDNA法及建立基因文庫的方法來篩選
直接獲取
1.從基因文庫中獲取 這個沒什么就是現(xiàn)成的基因儲存在受體菌上你用的時候提取出來就好了（基因組文庫法 就是原教材中的用限制性內(nèi)切酶直接獲取。利用λ噬菌體載體構(gòu)建基因組文庫的一般操作程序如下：① 選用特定限制性內(nèi)切酶， DNA進行部分酶解，得到DNA限制性片段② 選用適當?shù)南拗菩詢?nèi)切酶酶解λ噬菌體載體DNA。③ 經(jīng)適當處理，將基因組DNA限制性片段與λ噬菌體載體進行體外重組。④ 利用體外包裝系統(tǒng)將重組體包裝成完整的顆粒。⑤ 以重組噬菌體顆粒侵染大腸桿菌，形成大量噬菌斑，從而形成含有整個DNA的重組DNA群體，即文庫。）經(jīng)典解釋
2.cDNA文庫法（即原教材中提到的逆轉(zhuǎn)錄法）。cDNA文庫，是指匯集以某生物成熟mRNA為模板逆轉(zhuǎn)錄而成的cDNA序列的重組DNA群體。雖然可用基因組文庫法來獲取真核生物的目的基因，但是由于高等真核生物基因組DNA文庫比其cDNA文庫大得多，相關(guān)工作量同樣大得多。更為重要的是，在真核生物基因組中合有大量的間隔序列或內(nèi)含子，但在大腸桿菌等原核生物中沒有類似序列的存在，所以大腸桿菌不能從真核生物基因的初級轉(zhuǎn)錄本中去除間隔序列，即不能表達真核生物DNA。而在真核生物成熟mRNA中已不存在間隔序列（已在拼接過程中被去除），所以可以以真核生物成熟mRNA為模板，逆轉(zhuǎn)錄而成的cDNA可被大腸桿菌表達。因此，在基因工程中，cDNA文庫法是從真核生物細胞中分離目的基因的常用方法。
3.直接分離基因最常用的方法是“鳥槍法”，又叫“散彈射擊法”。這種方法有如用獵槍發(fā)射的散彈打鳥，無論哪一顆彈粒擊中目標，都能把鳥打下來。鳥槍法的具體做法是：用限制酶（即限制性內(nèi)切酶）將供體細胞中的DNA切成許多片段，將這些片段分別載入運載體，然后通過運載體分別轉(zhuǎn)入不同的受體細胞，讓供體細胞所提供的DNA（外源DNA）的所有片段分別在受體細胞中大量復制（在遺傳學中叫做擴增），從中找出含有目的基因的細胞，再用一定的方法吧帶有目的基因的DNA片段分離出來。如許多抗蟲，抗病毒的基因都可以用上述方法獲得。
用“鳥槍法”獲取目的基因的優(yōu)點是操作簡便，缺點是工作量大，具有一定的盲目性。
人工合成
1.（主要是序列已知的基因）。主要是通過DNA自動合成儀，通過固相亞磷酸酰胺法合成，具體過程可以網(wǎng)上查詢，反正是可以按照已知序列將核苷酸一個一個連接上去成為核苷酸序列，一般適于分子較小而不易獲得的基因。對于大的基因一般是先用化學合成法合成引物，再利用引物獲得目的基因。
2.聚合酶鏈反應(yīng)（Polymerase Chain Reaction ,PCR）是80年代中期發(fā)展起來的體外核酸擴增技術(shù)。它具有特異、敏感、產(chǎn)率高、快速、簡便、重復性好、易自動化等突出優(yōu)點；能在一個試管內(nèi)將所要研究 的目的基因或某一DNA片段于數(shù)小時內(nèi)擴增至十萬乃至百萬倍，使肉眼能直接觀察和判斷；可從一根毛發(fā)、一滴血、甚至一個細胞中擴增出足量的DNA供分析研 究和檢測鑒定。過去幾天幾星期才能做到的事情，用PCR幾小時便可完成。PCR技術(shù)是生物醫(yī)學領(lǐng)域中的一項革命性創(chuàng)舉和里程碑
他只是給目的基因的擴增
好累~。.
4.獲得目的基因的方法
化學合成法（主要是序列已知的基因）。主要是通過DNA自動合成儀，通過固相亞磷酸酰胺法合成，具體過程可以網(wǎng)上查詢，反正是可以按照已知序列將核苷酸一個一個連接上去成為核苷酸序列，一般適于分子較小而不易獲得的基因。對于大的基因一般是先用化學合成法合成引物，再利用引物獲得目的基因。
2、基因組文庫法（就是原教材中的用限制性內(nèi)切酶直接獲取法）。利用λ噬菌體載體構(gòu)建基因組文庫的一般操作程序如下：① 選用特定限制性內(nèi)切酶， DNA進行部分酶解，得到DNA限制性片段② 選用適當?shù)南拗菩詢?nèi)切酶酶解λ噬菌體載體DNA。③ 經(jīng)適當處理，將基因組DNA限制性片段與λ噬菌體載體進行體外重組。④ 利用體外包裝系統(tǒng)將重組體包裝成完整的顆粒。⑤ 以重組噬菌體顆粒侵染大腸桿菌，形成大量噬菌斑，從而形成含有整個DNA的重組DNA群體，即文庫。
3、cDNA文庫法（即原教材中提到的逆轉(zhuǎn)錄法）。cDNA文庫，是指匯集以某生物成熟mRNA為模板逆轉(zhuǎn)錄而成的cDNA序列的重組DNA群體。雖然可用基因組文庫法來獲取真核生物的目的基因，但是由于高等真核生物基因組DNA文庫比其cDNA文庫大得多，相關(guān)工作量同樣大得多。更為重要的是，在真核生物基因組中合有大量的間隔序列或內(nèi)含子，但在大腸桿菌等原核生物中沒有類似序列的存在，所以大腸桿菌不能從真核生物基因的初級轉(zhuǎn)錄本中去除間隔序列，即不能表達真核生物DNA。而在真核生物成熟mRNA中已不存在間隔序列（已在拼接過程中被去除），所以可以以真核生物成熟mRNA為模板，逆轉(zhuǎn)錄而成的cDNA可被大腸桿菌表達。因此，在基因工程中，cDNA文庫法是從真核生物細胞中分離目的基因的常用方法。
