下列哪些方法可以測(cè)出mic值(MIC的幾種測(cè)定抗菌藥物最低抑菌濃度MIC方法)
1.MIC的幾種測(cè)定抗菌藥物最低抑菌濃度（MIC）方法
1.1.常量肉湯稀釋法1.1.1.抗菌藥物貯存液制備 抗菌藥物貯存液濃度不應(yīng)低于1000μg/ml（如1280μg/ml）或10倍于最高測(cè)定濃度。
溶解度低的抗菌藥物可稍低于上述濃度?？咕幬镏苯淤?gòu)自廠商或相關(guān)機(jī)構(gòu)。
所需抗菌藥物溶液量或粉劑量可公式進(jìn)行計(jì)算。例如：需配制100 ml濃度為1280μg/ml的抗生素貯存液，所用抗生素為粉劑，其藥物的有效力為750μg/mg。
用分析天平精確稱取抗生素粉劑的量為182.6 mg。根據(jù)公式計(jì)算所需稀釋劑用量為：（182.6 mg*750μg/mg）/1280μg/ml=107.0ml，然后將182.6 mg抗生素粉劑溶解于107.0ml稀釋劑中。
制備抗菌藥物貯存液所用的溶劑和稀釋劑見表5。配制好的抗菌藥物貯存液應(yīng)貯存于-60℃以下環(huán)境，保存期不超過(guò)6個(gè)月。
1.1.2.藥敏試驗(yàn)用抗菌藥物濃度范圍 根據(jù)NCCLS抗菌藥物敏感性試驗(yàn)操作標(biāo)準(zhǔn)，藥物濃度范圍應(yīng)包含耐藥、中介和敏感分界點(diǎn)值，特殊情況例外。1.1.3. 培養(yǎng)基 NCCLS推薦使用Mueller-Hinton(MH)肉湯，pH7.2~7.4。
需氧菌及兼性厭氧菌在此培養(yǎng)基中生長(zhǎng)良好。在測(cè)試葡萄球菌對(duì)苯唑西林的敏感性時(shí)，應(yīng)在肉湯中加入2%(W/V)氯化鈉，按制造廠家的要求配制需要量的MH肉湯。
嗜血桿菌屬菌使用HTM肉湯，肺炎鏈球菌和其它鏈球菌使用含2%~5%溶解馬血的MH肉湯。1.1.4.接種物的制備 有2種方法配制接種物，一是細(xì)菌生長(zhǎng)方法，用接種環(huán)挑取形態(tài)相似待檢菌落3-5個(gè)，接種于4-5ml的水解酪蛋白（MH）肉湯中，35℃孵育2-6h。
增菌后的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期菌液用生理鹽水或MH肉湯校正濃度至0.5麥?zhǔn)媳葷針?biāo)準(zhǔn)，約含1~2*108CFU/ml。二是直接菌落懸液配制法，對(duì)某些苛養(yǎng)菌，如流感嗜血桿菌、淋病奈瑟菌和鏈球菌及甲氧西林耐藥的葡萄球菌等菌株，推薦直接取培養(yǎng)18~24h的菌落調(diào)配成0.5麥?zhǔn)媳葷針?biāo)準(zhǔn)的菌懸液。
用MH肉湯將上述菌懸液進(jìn)行1∶100稀釋后備用。注意應(yīng)在15分鐘內(nèi)接種完配制好的接種物，并取一份接種物在非選擇性瓊脂平板上傳代培養(yǎng)，以檢查接種物純度。
1.1.5.稀釋抗菌藥物的制備及菌液接種 取無(wú)菌試管（13*100mm）13支，排成一排，除第1管加入1.6mlMH肉湯外，其余每管加入MH肉湯1ml，在第1管加入抗菌藥物原液（如1280μg/ml） 0.4ml混勻，然后吸取1ml至第2管，混勻后再吸取1ml至第3管，如此連續(xù)倍比稀釋至第11管，并從第11管中吸取1ml棄去，第12管為不含藥物的生長(zhǎng)對(duì)照。此時(shí)各管藥物濃度依次為256、128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25μg/ml。
然后在每管內(nèi)加入上述制備好的接種物各1ml，使每管最終菌液濃度約為5*105CFU/ml。第1管至第11管藥物濃度分別為128、64、32、16、8、4、2、1、05、0.25、0.125μg/ml。
1.1.6.孵育 將接種好的稀釋管塞好塞子，置35℃普通空氣孵箱中孵育16~20h；嗜血桿菌和鏈球菌在普通空氣孵箱中孵育20~24h；對(duì)可能的耐甲氧西林葡萄球菌和耐萬(wàn)古霉素腸球菌應(yīng)持續(xù)孵育滿24h。1.1.7.結(jié)果判斷與解釋 在讀取和報(bào)告所測(cè)試菌株的MIC前，應(yīng)檢查生長(zhǎng)對(duì)照管的細(xì)菌生長(zhǎng)情況是否良好，同時(shí)還應(yīng)檢查接種物的傳代培養(yǎng)情況以確定其是否污染，質(zhì)控菌株的MIC值是否處于質(zhì)控范圍。
以肉眼觀察，藥物最低濃度管無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)者，即為受試菌的MIC。甲氧芐胺嘧啶或磺胺藥物的肉湯稀釋法終點(diǎn)判斷，與陽(yáng)性生長(zhǎng)對(duì)照管比較抑制80%細(xì)菌生長(zhǎng)管藥物濃度為受試菌MIC。
根據(jù)NCCLS推薦的分界點(diǎn)值標(biāo)準(zhǔn)，判斷耐藥（resistant, R）、敏感（susceptible, S）或中介（intermediate, I）。S表示被測(cè)菌株所引起的感染可以用該抗菌藥物的常用劑量治療有效，禁忌癥除外。
R指該菌不能被抗菌藥物的常用劑量在組織液內(nèi)或血液中所達(dá)到的濃度所抑制，或?qū)儆诰哂刑囟退帣C(jī)理（如β-內(nèi)酰胺酶），所以臨床治療效果不佳。I是指MIC接近藥物的血液或組織液濃度，療效低于敏感菌。
還表示被測(cè)菌株可以通過(guò)提高劑量（如β-內(nèi)酰胺類藥物）被抑制，或在藥物生理性濃集的部位（如尿液）被抑制。另外，中介還作為“緩沖域”，以防止由微小的技術(shù)因素失控，所導(dǎo)致較大的錯(cuò)誤解釋。
1.2.微量肉湯稀釋法1.2.1.抗菌藥物和培養(yǎng)基制備 同常量肉湯稀釋法。1.2.2.MIC板制備 無(wú)菌操作，將倍比稀釋后不同濃度的抗菌藥物溶液分別加到滅菌的96孔聚苯乙烯板中，第1至第11孔加藥液，每孔10μl，第12孔不加藥作為生長(zhǎng)對(duì)照，冰凍干燥后密封，-20℃以下保存?zhèn)溆谩?/p>
1.2.3.接種物制備 將用生長(zhǎng)法或直接菌懸液法制備的濃度相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)媳葷針?biāo)準(zhǔn)的菌懸液，經(jīng)MH肉湯1∶1000稀釋后，向每孔中加100μl，密封后置35℃普通空氣孵箱中，孵育16~20h判斷結(jié)果。當(dāng)試驗(yàn)嗜血桿菌屬，鏈球菌屬時(shí)，孵育時(shí)間為20~24h，試驗(yàn)葡萄球菌和腸球菌對(duì)苯唑西林和萬(wàn)古霉素的藥敏試驗(yàn)時(shí)孵育時(shí)間必須滿24h。
此時(shí)，第1孔至第11孔藥物濃度分別為128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125μg/ml。1.2.4.結(jié)果判斷 以在小孔內(nèi)完全抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的最低藥物濃度為MIC。
當(dāng)陽(yáng)性對(duì)照孔（即不含抗生素）內(nèi)細(xì)菌明顯生長(zhǎng)試驗(yàn)才有意義。當(dāng)在微量肉湯稀釋法出現(xiàn)單一的跳孔時(shí)，應(yīng)記錄抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的最高藥物濃度。
如出現(xiàn)多處跳孔，則不應(yīng)報(bào)告結(jié)果，需重復(fù)試驗(yàn)。通常對(duì)革蘭陰性桿菌而言，微量肉湯稀釋法測(cè)得。
2.哪些方法測(cè)出的硬度值可以進(jìn)行比較
硬度材料局部抵抗硬物壓入其表面的能力稱為硬度。
早在1822年，F(xiàn)riedrich mohs提出用10種礦物來(lái)衡量世界上最硬的和最軟的物體，這是所謂的摩氏硬度計(jì)。按照他們的軟硬程度分為十級(jí)：1）滑石 2）石膏 3）方解石 4）螢石 5）磷灰石 6）正長(zhǎng)石 7）石英8）黃玉 9）剛玉 10）金剛石各級(jí)之間硬度的差異不是均等的，等級(jí)之間只表示硬度的相對(duì)大小。
試驗(yàn)鋼鐵硬度的最普通方法是用銼刀在工件邊緣上銼擦，由其表面所呈現(xiàn)的擦痕深淺以判定其硬度的高低。這種方法稱為銼試法這種方法不太科學(xué)。
用硬度試驗(yàn)機(jī)來(lái)試驗(yàn)比較準(zhǔn)確，是現(xiàn)代試驗(yàn)硬度常用的方法。常用的硬度測(cè)定方法有布氏硬度、洛氏硬度和維氏硬度等測(cè)試方法 硬度是衡量金屬材料軟硬程度的一項(xiàng)重要的性能指標(biāo)，它既可理解為是材料抵抗彈性變形、塑性變形或破壞的能力，也可表述為材料抵抗殘余變形和反破壞的能力。
硬度不是一個(gè)簡(jiǎn)單的物理概念，而是材料彈性、塑性、強(qiáng)度和韌性等力學(xué)性能的綜合指標(biāo)。硬度試驗(yàn)根據(jù)其測(cè)試方法的不同可分為靜壓法（如布氏硬度、洛氏硬度、維氏硬度等）、劃痕法（如莫氏硬度）、回跳法（如肖氏硬度）及顯微硬度、高溫硬度等多種方法。
布氏硬度以HB[N(kgf/mm2)]表示（HBS\HBW）（參照GB/T231-1984），生產(chǎn)中常用布氏硬度法測(cè)定經(jīng)退火、正火和調(diào)質(zhì)得剛健，以及鑄鐵、有色金屬、低合金結(jié)構(gòu)鋼等毛胚或半成品的硬度。洛氏硬度可分為HRA、HRB、HRC、HRD四種，它們的測(cè)量范圍和應(yīng)用范圍也不同。
一般生產(chǎn)中HRC用得最多。壓痕較小，可測(cè)較薄得材料和硬得材料和成品件得硬度。
維氏硬度以HV表示（參照GB/T4340-1999），測(cè)量極薄試樣。1、鋼材的硬度 ：金屬硬度（Hardness）的代號(hào)為H。
按硬度試驗(yàn)方法的不同， 常規(guī)表示有布氏（HB）、洛氏（HRC）、維氏（HV）、里氏（HL）硬度等，其中以HB及HRC較為常用。 HB應(yīng)用范圍較廣，HRC適用于表面高硬度材料，如熱處理硬度等。
兩者區(qū)別在于硬度計(jì)之測(cè)頭不同，布氏硬度計(jì)之測(cè)頭為鋼球，而洛氏硬度計(jì)之測(cè)頭為金剛石。 HV-適用于顯微鏡分析。
維氏硬度（HV） 以120kg以內(nèi)的載荷和頂角為136°的金剛石方形錐壓入器壓入材料表面，用材料壓痕凹坑的表面積除以載荷值，即為維氏硬度值（HV）。 HL手提式硬度計(jì)，測(cè)量方便，利用沖擊球頭沖擊硬度表面后，產(chǎn)生彈跳；利用沖頭在距試樣表面1mm處的回彈速度與沖擊速度的比值計(jì)算硬度，公式：里氏硬度HL=1000*VB（回彈速度）/ VA（沖擊速度）。
便攜式里氏硬度計(jì)用里氏（HL）測(cè)量后可以轉(zhuǎn)化為：布氏（HB）、洛氏（HRC）、維氏（HV）、肖氏（HS）硬度。或用里氏原理直接用布氏（HB）、洛氏（HRC）、維氏（HV）、里氏（HL）、肖氏（HS）測(cè)量硬度值。
2、HB - 布氏硬度； 布氏硬度（HB）一般用于材料較軟的時(shí)候，如有色金屬、熱處理之前或退火后的鋼鐵。洛氏硬度（HRC）一般用于硬度較高的材料，如熱處理后的硬度等等。
布式硬度（HB）是以一定大小的試驗(yàn)載荷，將一定直徑的淬硬鋼球或硬質(zhì)合金球壓入被測(cè)金屬表面，保持規(guī)定時(shí)間，然后卸荷，測(cè)量被測(cè)表面壓痕直徑。布式硬度值是載荷除以壓痕球形表面積所得的商。
一般為：以一定的載荷（一般3000kg）把一定大小（直徑一般為10mm）的淬硬鋼球壓入材料表面，保持一段時(shí)間，去載后，負(fù)荷與其壓痕面積之比值，即為布氏硬度值（HB），單位為公斤力/mm2 (N/mm2)。 3、洛式硬度是以壓痕塑性變形深度來(lái)確定硬度值指標(biāo)。
以0.002毫米作為一個(gè)硬度單位。當(dāng)HB>450或者試樣過(guò)小時(shí)，不能采用布氏硬度試驗(yàn)而改用洛氏硬度計(jì)量。
它是用一個(gè)頂角120°的金剛石圓錐體或直徑為1.59、3.18mm的鋼球，在一定載荷下壓入被測(cè)材料表面，由壓痕的深度求出材料的硬度。根據(jù)試驗(yàn)材料硬度的不同，分三種不同的標(biāo)度來(lái)表示： HRA：是采用60kg載荷和鉆石錐壓入器求得的硬度，用于硬度極高的材料（如硬質(zhì)合金等）。
HRB：是采用100kg載荷和直徑1.58mm淬硬的鋼球，求得的硬度，用于硬度較低的材料（如退火鋼、鑄鐵等）。 HRC：是采用150kg載荷和鉆石錐壓入器求得的硬度，用于硬度很高的材料（如淬火鋼等）。
另外： 1.HRC含意是洛式硬度C標(biāo)尺， 2.HRC和HB在生產(chǎn)中的應(yīng)用都很廣泛 3.。
3.Microplate Alamar Blue Assay 是什么
微孔板Alamar藍(lán)含量。
1. 細(xì)胞貼壁后加入各組細(xì)胞溫育液和
SMMC-7721細(xì)胞以5.0*103/孔加入96孔板。.細(xì)胞貼壁后加入各組細(xì)胞溫育液和alamar。Blue,alamar
2. 肝癌細(xì)胞還原
表2。肝癌細(xì)胞還原alamar。Blue值（%， n
有關(guān)資料：
最小抑菌濃度（MIC）值的判斷采用alamar blue染色法，保證抑菌實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)判斷客觀準(zhǔn)確；并以氟康唑?qū)δ钪楸唾|(zhì)控制株MIC測(cè)定值作為標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)探指標(biāo)，測(cè)定了山蒼子油對(duì)臨床常見的念珠菌種，包括天然耐唑類抗菌藥的克柔氏念珠菌的抗菌效果，測(cè)出山蒼子油對(duì)念珠菌的平均MIC，其中白念珠菌：14.14μg/ML，熱帶念珠菌：23.22μg/ML，光骨念珠菌：31.24μg/ML，近平滑念珠菌：76.19μg/ML，克柔氏念珠菌：28.30μg/ML；電鏡顯示山蒼子油在1/2MIC時(shí)即對(duì)天然耐唑類藥的克柔氏念珠菌有較強(qiáng)的破壞性作用。
