1、超微量分光光度計(jì)測(cè)260nm吸收值計(jì)算。
可以定量溶于緩沖液的寡核苷酸,單鏈、雙鏈DNA,以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波長(zhǎng)260 nm。
2、也可以用RNA膠(凝膠成像)檢測(cè)。例如:原核生物的核糖體所含的rRNA有5S、16S及23S三種。在膠上就有三條明顯大小不一的條帶。凝膠遷移分析??梢杂脕硌芯縍NA-蛋白相互作用?;驹硎牵航Y(jié)合了蛋白的RNA在凝膠中的遷移速率更慢,因而可以區(qū)分出結(jié)合蛋白與未結(jié)合蛋白的RNA條帶。
擴(kuò)展資料
1、RNA的功能是:
(1)具有肽酰轉(zhuǎn)移酶的活性。
(2)為tRNA提供結(jié)合位點(diǎn)。
(3)在蛋白質(zhì)合成起始時(shí),參與同mRNA選擇性的結(jié)合,在肽鏈的延伸中與mRNA結(jié)合。
2、原核生物的rRNA分三類:5SrRNA、16SrRNA和23SrRNA。
真核生物的rRNA分四類:5SrRNA、5.8SrRNA、18SrRNA和28SrRNA。
S為大分子物質(zhì)在超速離心沉降中的一個(gè)物理學(xué)單位,可間接反映分子量的大小。原核生物和真核生物的核糖體均由大、小兩種亞基組成。
3、凝膠成像對(duì)DNA或RNA膠 進(jìn)行切膠、拍照、觀察、分析的實(shí)驗(yàn)室類儀器,凝膠成像系統(tǒng)可以應(yīng)用于分子量計(jì)算、密度掃描、密度定量、PCR定量等生物工程常規(guī)研究。
參考資料來源:百度百科—核糖體RNA
參考資料來源:百度百科—超微量分光光度計(jì)
參考資料來源:百度百科—凝膠成像
參考資料來源:百度百科—RNA GEL SHIFT
1. 相關(guān)概念
RNA質(zhì)檢參數(shù)OD260/OD280、OD260/OD230的意義。
260、280、320、230nm下的吸光度分別代表了核酸、蛋白質(zhì)、鹽濃度和有機(jī)溶劑的值。
A230: 測(cè)定其它碳源物質(zhì),如酚,糖類等。
A260:核酸的吸收峰測(cè),測(cè)RNA,DNA,引物等的濃度用的。
A280:蛋白質(zhì)的吸收峰。
一般的,我們只看OD260/OD280(Ratio,R)在1.8~2.1范圍內(nèi)時(shí),我們認(rèn)為 RNA中蛋白的污染是可以容忍的,不過要注意,當(dāng)用 Tris 作為緩沖液檢測(cè)吸光度時(shí),R 值可能會(huì)大于 2(一般應(yīng)該是<2.2的)。當(dāng)R < 1.8時(shí),溶液中蛋白的污染比較明顯,可以根據(jù)自己的需要決定這份RNA 的命運(yùn)。當(dāng)R > 2.2時(shí),說明RNA已經(jīng)水解成單核酸了。純RNA的OD260/OD280的比值為2.0。
2. RNA質(zhì)量檢驗(yàn)
RNA樣品的品質(zhì)檢測(cè)一般分為總量,純度與完整性三大項(xiàng)。
總量:微量分光光度計(jì)測(cè)260nm吸收值計(jì)算。
純度:微量分光光度計(jì)測(cè)260nm/230nm吸收值的比值,用于評(píng)估有機(jī)溶劑殘留;260nm/280nm吸收值的比值,用于評(píng)估蛋白質(zhì)污染比例。
完整性:以Agilent Bioanalyzer進(jìn)行毛細(xì)管電泳(capillary electrophoresis),并以軟件的RIN(RNA Integrity Number)分?jǐn)?shù)評(píng)估,10為RNA完整性最好,0為最差。
l RNA純度
RNA在純化過程中容易受到DNA、蛋白質(zhì)及有機(jī)溶劑的影響,這些殘存物將會(huì)影響以后的操作。光譜分析(NANODROP)利用物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)光的吸收度的不同,可以鑒別出溶液純度及濃度。RNA溶液的A260/A280的比值是一種RNA純度檢測(cè)方法,比值范圍一般為1.8-2.1。各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)對(duì)RNA純度要求不一,比如即使比值超出這個(gè)范圍,RNA樣品也一樣可以用于一些普通實(shí)驗(yàn)中,如Northern雜交、RT-PCR、熒光定量PCR和RNA酶保護(hù)等實(shí)驗(yàn)。
酵母rna含量測(cè)定的方法有幾種
(1) 取潔凈的血球計(jì)數(shù)板一塊,在計(jì)數(shù)室上蓋上一塊蓋玻片。
(2) 將酵母菌液搖勻,用滴管吸取少許,從計(jì)數(shù)板中間平臺(tái)兩側(cè)的溝槽內(nèi)沿蓋玻片的下邊緣滴入一小滴(不宜過多),使菌液沿兩玻片間自行滲入計(jì)數(shù)室,勿使產(chǎn)生氣泡,并用吸水紙吸去溝槽中流出的多余菌液。也可以將菌液直接滴加在計(jì)數(shù)室上,然后加蓋蓋玻片(勿使產(chǎn)生氣泡)。
(3) 靜置約5分鐘,先在低倍鏡下找到計(jì)數(shù)室后,再轉(zhuǎn)換高倍鏡觀察計(jì)數(shù)。
(4) 計(jì)數(shù)時(shí)用16中格的計(jì)數(shù)板,要按對(duì)角線方位,取左上、左下、右上、右下的4個(gè)中格(即100小格)的酵母菌數(shù)。如果是25中格計(jì)數(shù)板。除數(shù)上述四格外,還需數(shù)中央1中格的酵母菌數(shù)(即80小格)。由于菌體在計(jì)數(shù)室中處于不同的空間位置,要在不同的焦距下才能看到,因而觀察時(shí)必須不斷調(diào)節(jié)微調(diào)螺旋,方能數(shù)到全部菌體,防止遺漏。如菌體位于中格的雙線上,計(jì)數(shù)時(shí)則數(shù)上線不數(shù)下線,數(shù)左線不數(shù)右線,以減少誤差。
(5) 凡酵母菌的芽體達(dá)到母細(xì)胞大小一半時(shí),即可作為兩個(gè)菌體計(jì)算。每個(gè)樣品重復(fù)分?jǐn)?shù)2-3次(每次數(shù)值不應(yīng)招差過大,否則應(yīng)重新操作),取其平均值,按下述公式計(jì)算出每毫升菌液所含酵母菌細(xì)胞數(shù)。 每毫升菌液含菌數(shù)=每小格酵母細(xì)胞數(shù)*4000*1000*稀釋倍數(shù) 。
(6) 血球計(jì)數(shù)板用后,在水龍頭上用水柱沖洗干凈,切勿用硬物洗刷或抹擦,以免損壞網(wǎng)格刻度。洗凈后自行晾干或吹風(fēng)機(jī)吹干。
檢測(cè)RNA溶液的吸光度
280、320、230、260nm下的吸光度分別代表了核酸、背景(溶液渾濁度)、鹽濃度和蛋白等有機(jī)物的值。一般的,我們只看OD260/OD280(Ratio,R)。1.82.0時(shí),我們認(rèn)為RNA中蛋白或者時(shí)其他有機(jī)物的污染是可以容忍的,不過要注意,當(dāng)你用Tris作為緩沖液檢測(cè)吸光度時(shí),R值可能會(huì)大于2(一般應(yīng)該是〈2.2的)。當(dāng)R〈1.8時(shí),溶液中蛋白或者時(shí)其他有機(jī)物的污染比較明顯,你可以根據(jù)自己的需要決定這份RNA的命運(yùn)。當(dāng)R〉2.2時(shí),說明RNA已經(jīng)水解成單核酸了。
生物幫上面有詳細(xì)的介紹, 細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù),細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)技術(shù),細(xì)胞侵襲。
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